论文部分内容阅读
目的:检测p38MAPK在犬体外循环(CPB)缺血再灌注心肌胰岛素抵抗(IR)中的表达,分析心肌细胞中p38MAPK对葡萄糖转运蛋白-4(GLUT4)的影响,进一步探讨缺血再灌注心肌胰岛素抵抗中介导GLUT4表达的信号传导通路。方法:健康杂种犬24条随机分成四组。组Ⅰ(n=6)不阻断主动脉;组Ⅱ(n=6)主动脉阻断60min;组Ⅲ(n=6)主动脉阻断60min+茴香霉素(p38MAPK激动剂);组Ⅳ(n=6)主动脉阻断60min+SB203580(p38MAPK阻断剂)。分别在体外循环转流前(T1)、开放主动脉后15min(T2)、60min(T3)、90min(T4)四个时间点,取动脉血、冠状静脉窦血和左室心尖部心肌组织。运用放射免疫法测定血浆胰岛素、胰高血糖素浓度;氧化酶法测定血浆葡萄糖浓度,并根据所测数据进一步计算分析心肌的葡萄糖净摄取量和葡萄糖净摄取率;分析比较各时间点的与胰岛素抵抗(IR)相关的指标的变化;同时监测围手术期血流动力学的变化;免疫组化测定p38MAPK、p-p38MAPK和GLUT4蛋白表达,并以图象分析系统检测分析蛋白表达的变化情况;Real Time RT-PCR法检测心肌P38MAPK和GLUT4的mRNA量的表达及变化。结果:1.葡萄糖代谢:在心肌缺血再灌注后,组Ⅱ、组Ⅲ和组Ⅳ的血浆葡萄糖浓度,与组Ⅰ和转流前比较均存在不同程度增高(P<0.05或P<0.01);与组Ⅱ比较,组Ⅲ血浆葡萄糖浓度增高低,持续时间短、恢复快(P<0.01),组Ⅳ血浆葡萄糖浓度增高程度更高,持续时间长、恢复慢(P<0.05或P<0.01);组Ⅳ与组Ⅲ比较,血浆葡萄糖浓度增高更明显,持续时间更长、恢复更慢(P<0.01)。组Ⅱ、组Ⅲ和组Ⅳ三组的心肌葡萄糖净摄取量及净取率较组Ⅰ以及体外循环转流前均存在不同程度明显降低(P<0.05或P<0.01);与组Ⅱ比较,组Ⅲ心肌葡萄糖净摄取量及净取率降低程度低,持续时间短、恢复快(P<0.05或P<0.01),组Ⅳ心肌葡萄糖净摄取量及净取率降低更明显,持续时间长、恢复慢(P<0.05或P<0.01);与组Ⅲ比较,组Ⅳ心肌葡萄糖净摄取量及净取率降低更明显,持续时间更长、恢复更慢(P<0.01)。2.血浆胰岛素和胰高血糖素:在心肌缺血再灌注后,组Ⅱ、组Ⅲ和组Ⅳ的外周血浆胰岛素和胰高血糖素浓度,与组Ⅰ和转流前比较均存在不同程度增高(P<0.05或P<0.01);与组Ⅱ比较,组Ⅲ血浆胰岛素和胰高血糖素浓度增高程度低,持续时间短、恢复快(P<0.01),组Ⅳ胰岛素和胰高血糖素浓度增高更明显,持续时间长、恢复慢(P<0.05或P<0.01);与组Ⅲ比较,组Ⅳ血浆胰岛素和胰高血糖素浓度增高更明显,持续时间长、恢复慢(P<0.01)。3.胰岛素抵抗指数:在心肌缺血再灌注后,组Ⅱ、组Ⅲ和组Ⅳ三组的胰岛素抵抗指数较组Ⅰ以及转流前均存在不同程度明显升高(P<0.05或P<0.01);与组Ⅱ比较,组Ⅲ胰岛素抵抗指数升高不明显,持续时间短、恢复快(P<0.05或P<0.01),组Ⅳ胰岛素抵抗指数升高更明显,持续时间长、恢复慢(P<0.05或P<0.01);与组Ⅲ比较,组Ⅳ胰岛素抵抗指数升高更明显,持续时间更长、恢复更慢(P<0.01)。4.心功能指标:在心肌缺血再灌注后,组Ⅱ、组Ⅲ和组Ⅳ三组的LVSP和dp/dtmax较组Ⅰ以及转流前均存在不同程度明显降低,LVEDP均存在不同程度明显升高(P<0.05或P<0.01);与组Ⅱ比较,组Ⅲ的LVSP及dp/dtmax下降不明显,LVEDP升高不显著,持续时间短,恢复快(P<0.05或P<0.01),组Ⅳ的LVSP及dp/dtmax下降更明显,LVEDP升高更显著,持续时间更长、恢复更慢(P<0.05或P<0.01)。与组Ⅲ比较,组Ⅳ的LVSP及dp/dtmax下降更明显,LVEDP升高更显著,持续时间更长、恢复更慢(P0.01)。5.心肌P38MAPK和GLUT4的蛋白及总mRNA表达量:心肌缺血再灌注后,较组Ⅰ以及体外循环转流前,组Ⅱ、组Ⅳ的心肌P38MAPK蛋白及总mRNA表达均明显降低(P<0.05或P<0.01);组Ⅲ心肌p38MAPK蛋白及总mRNA表达上升(P<0.05或P<0.01)。与组Ⅱ相比较,组Ⅲ心肌细胞p38MAPK蛋白及总mRNA的表达量高于该组(P<0.01);组Ⅳ心肌细胞p38MAPK蛋白及总mRNA的表达量下降明显(P<0.05或P<0.01)。与组Ⅲ比较,组Ⅳ心肌细胞p38MAPK蛋白及总mRNA的表达量下降更明显(P<0.01)。在心肌缺血再灌注后,较组Ⅰ和转流前相比,组Ⅱ和组Ⅳ的心肌细胞GLUT4蛋白及总mRNA表达量均存在不同程度降低(P<0.05或P<0.01);组Ⅲ心肌细胞GLUT4蛋白及总mRNA表达量表现出明显的上升(P<0.01);与组Ⅱ相比较,体外循环心肌缺血再灌注后组Ⅲ心肌细胞GLUT4蛋白及总mRNA的表达量高于该组(P<0.01);组Ⅳ心肌细胞GLUT4蛋白及总mRNA的表达量下降明显(P<0.05或P<0.01)。与组Ⅲ比较,组Ⅳ心肌细胞GLUT4蛋白及总mRNA的表达量下降更严重(P<0.01)。结论:在缺血再灌注心肌胰岛素抵抗过程中,p38MAPK是介导心肌细胞GLUT4表达的信号传导通路之一。