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目的：通过外源基因导入技术抑制和增强喉鳞状细胞癌细胞-Hep2中RhoC(Ras homology C,Ras同源类似物C)表达，观察肿瘤细胞凋亡、运动、形态学变化及肿瘤干细胞标记物ALDH1A1（Aldehydedehydrogenase1family, member A1乙醛脱氢酶1A1）表达的变化，研究RhoC对喉鳞状细胞癌生物学行为及肿瘤起始细胞群-肿瘤干细胞的影响，为以RhoC为治疗靶点控制喉鳞癌的转移提供实验支持。方法：（1）通过分子生物学方法设计合成干扰RhoC表达可转录形成RhoC-shRNA（RhoC-short hairpin ribonucleic acid,RhoC短发卡核糖核酸）从而抑制RhoC表达的RhoC-shRNA基因重组质粒GW-shRNA （RhoC-shRNA基因真核表达质粒载体为pENTR/U6-EGFP）和增强RhoC表达的RhoC G14V基因重组质粒13GS03（RhoC G14V基因真核表达质粒载体为pcDNA3.1-EGFP）。（2）运用脂质体转染方法，将重组质粒转染至喉鳞状细胞癌细胞系-Hep2细胞中，并通过转染条件优化，获得最佳细胞转染率。（3） QPCR(Real-time Quantitativepolymerasechainreaction Detecting System,实时定量基因扩增荧光检测系统)技术检测影响RhoC表达后Hep2肿瘤干细胞标志物-ALDH1A1的mRNA(messenger ribonucleic acid,信使RNA)表达。（4）TUNEL法检测影响RhoC表达后Hep2细胞凋亡情况的变化。（5）荧光染色细胞骨架观察影响RhoC表达后，Hep2细胞的形态变化。（6）划痕实验观察影响RhoC表达后Hep2细胞的的运动能力的变化。结果：（1）通过将两种重组质粒进行基因测序及采用脂质体法转染293T肾上皮细胞系，证实干扰RhoC表达的重组质粒-GW-shRNA和增强RhoC表达的重组质粒-13GS03构建成功。（2）24孔板培养条件下，抑制RhoC表达的重组质粒GW-shRNA和增强RhoC表达的重组质粒13GS03与脂质体以1.2μｇ质粒与4.2μl脂质体混合形成的转染复合物，Hep2喉鳞癌细胞转染率最高。（3）抑制Hep2细胞RhoC表达后：肿瘤干细胞标记物ALDH1A1表达显著降低；凋亡增强；细胞形态改变明显，胞体较大，形状近似多边形。（4）增强Hep2细胞RhoC表达后：肿瘤干细胞标记物ALDH1A1及肿瘤细胞凋亡较未处理Hep2细胞变化不显著；细胞形态变化明显，细胞近似梭形，类似间充质细胞形态，提示细胞运动能力增强。（5）划痕实验检测细胞运动能力结果显示抑制RhoC表达使喉鳞癌Hep2肿瘤细胞运动能力减低；增强RhoC表达后Hep2肿瘤细胞运动能力增强。结论：1、成功构建抑制RhoC表达重组质粒GW-shRNA和增强RhoC表达重组质粒13GS03，为后续研究RhoC在喉鳞癌Hep2细胞中的功能奠定了实验基础。2、通过QPCR技术检测增强RhoC表达后喉鳞状细胞癌Hep2肿瘤细胞群中肿瘤干细胞标记物ALDH1A1与空白对照组相比无显著变化，但抑制RhoC表达后ALDH1A1显著降低，间接说明了RhoC参与喉鳞癌肿瘤干细胞的形成，在转移灶起始发生中具有一定的作用。3、通过改变Hep2细胞中RhoC表达，观察肿瘤细胞的凋亡情况，结果显示增强RhoC表达后细胞肿瘤细胞凋亡现象不明显，与对照组相比无明显变化，抑制RhoC表达肿瘤细胞凋亡增强，说明RhoC具有抑制喉鳞癌肿瘤细胞凋亡的作用，提高了肿瘤细胞在转移扩散中对周围陌生环境的适应能力，使具有活性的肿瘤细胞能够顺利到达转移瘤发生部位。4、通过改变RhoC表达观察Hep2细胞形态及运动能力的变化，结果显示，增强RhoC表达后喉鳞癌肿瘤细胞运动能力增强，抑制RhoC表达后肿瘤细胞运动能力减弱，说明RhoC对喉鳞癌肿瘤细胞扩散转移具有促进作用。由此可见，RhoC在喉鳞状细胞癌转移灶形成中发挥着重要作用，以RhoC为治疗靶点具有重要的临床应用价值。