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目的：本实验为研究C3及其缺失突变体C3(1-840)、C3(824-1663)蛋白与CLIC1蛋白的相互作用，分别构建带FLAG标签的C3及其缺失突变体C3(1-840)、C3(824-1663)的真核表达载体，将C3及其缺失突变体C3(1-840)、C3(824-1663)质粒通过转染的方法转染至COS7细胞，观察各组分蛋白在细胞中的定位；构建缺失突变体酵母表达载体，进行酵母双杂交实验；通过将C3及其缺失突变体C3(1-840)、C3(824-1663)质粒与CLIC1蛋白共同瞬时转染至HEK293T细胞，通过免疫共沉淀技术，在哺乳动物细胞内，检测C3及其缺失突变体C3(1-840)、C3(824-1663)蛋白与CLIC1蛋白的相互作用。 方法：根据PCR方法分别扩增野生型C3及其缺失突变体C3(1-840)、C3(824-1663)序列，酶切回收目的片段，插入到pCDNA3.1载体上，构建pCDNA3.1-C3-FLAG、pCDNA3.1-C3(1-840)-FLAG、pCDNA3.1-C3(824-1663)-FLAG质粒；用同样的方法构建pGADT7-C3(1-840)、pGADT7-C3(824-1663)、pGBKT7-C3(1-840)和pGBKT7-C3(824-1663)酵母表达载体，对于酶切鉴定正确的质粒，跟Marker对比后正确的送往测序公司测序。分别将C3的缺失突变体C3(1-840)、C3(824-1663)和CLIC1的酵母表达载体，共同转化至酵母菌AH109中，在SD/-Leu/-Trp/-His/3AT/X-α-gal固体培养基上进行筛选，利用酵母双杂交技术，检测C3的缺失突变体C3(1-840)、C3(824-1663)和CLIC1蛋白在酵母细胞中大致的蛋白质相互作用。把已构建成功的pCDNA3.1-C3-FLAG、pCDNA3.1-C3(1-840)-FLAG、pCDNA3.1-C3(824-1663)-FLAG质粒分别转染到COS7细胞中，细胞制片后在荧光显微镜下观察；分别将带FLAG标签的C3及其缺失突变体C3(1-840)、C3(824-1663)与带GFP标签的CLIC1质粒共转到HEK293T细胞，通过免疫共沉技术，检测C3及其缺失突变体蛋白与CLIC1蛋白在HEK293T细胞中的相互作用。 结果：根据测序公司的测序结果比对基因序列确定构建是否成功。酵母实验中，共表达C3及其缺失突变体C3(1-840)与CLIC1两种融合蛋白后细胞没有变蓝，而共表达C3(824-1663)与CLIC1两种融合蛋白后，在酵母盘子中有细胞变蓝，说明有相互作用；在免疫荧光显微镜下观察，在COS7细胞中，C3及其缺失突变体C3(1-840)、C3(824-1663)蛋白主要分布在细胞质中，在细胞核中几乎没有，CLIC1蛋白的分布主要在细胞核内，尤其是在核膜上，细胞质中较少分布；而C3(824-1663)的缺失突变体蛋白的定位除在细胞质中分布外，在核膜处有斑点集中分布。共定位实验观察到缺失突变体C3(824-1663)与CLIC1蛋白在细胞质中有共定位现象，而C3和缺失突变体C3(1-840)与CLIC1蛋白在细胞质中不存在明显的共定位。根据免疫共沉淀的结果显示，在HEK293T细胞中，C3和C3(1-840)与CLIC1蛋白不存在相互作用。 结论：通过以上实验证明了C3和C3(1-840)蛋白与CLIC1蛋白在细胞中没有相互作用，C3(824-1663)与CLIC1蛋白在细胞内可能存在相互作用。