目的：　　皮肤型的人乳头状瘤病毒 HPV 人群感染率非常普遍，大多数 HPV 感染不引起症状并能自行消退。但高危型 HPV 感染的持续存在将会导致疣的形成或癌前病变。本研究的目的通过分析核酸疫苗免疫过程，组合优势抗原表位HPV16/18 E6，E7，L1，L2、DC募集佐剂Flt3L和GM-CSF、共刺激分子B7.1免疫策略。以此来增强疫苗的协同免疫作用，并且激活特异性和非特异性免疫细胞，寻找HPV16、HPV18核酸疫苗最佳的免疫策略，以期达到防治高危型HPV感染的目的。　　材料和方法：　　首先在载体中加入双顺反子表达元件 IRES，构建双顺反子表达载体pVAX1-IRES，然后在其下游插入人的GM-CSF-B7.1融合基因及Flt3-L片段。最后，在载体上游插入高危型 HPV 基因编码抗原蛋白HPV16/18 E6，E7，L1， L2基因片段，将构建成功的质粒利用脂质体转入B16细胞，实时荧光定量qPCR检测表达。　　结果：　　qPCR及测序结果表明重组质粒pVAX1-HPV16 E6，E7，L1，L2-IRES-GM-CSF-B.7.1和pVAX1-IRES-HPV18 E6，E7，L1，L2-Flt3-L含有HPV16/18 E6， E7、DC募集佐剂分子Flt3L和GM-CSF、以及共刺激分子B7.1片段，方向及大小正确，蛋白质免疫沉淀实验显示转染重组质粒后可在细胞内高效表达。　　结论：　　我们成功利用双启动子和融合蛋白双价表达质粒构建了包含分子佐剂Flt3L 或 GM-CSF 与共刺激分子 B7.1，以及高危型的 HPV 的抗原表位 HPV16/18 E6，E7，L1，L2基因质粒表达载体。获得了免疫增强型HPV16，18核酸疫苗，同时证明构建双价DNA疫苗是可行的，体外实验表明可在B16细胞内高效表达。本研究构建的质粒有望成为治疗性 HPV 核酸疫苗，但其免疫保护水平需要进一步的研究。