肿瘤标志物是一类由肿瘤细胞产生、或是机体在肿瘤刺激下异常产生的物质,可以用于肿瘤的疾病诊断、病情监测等。肿瘤标志物种类较多,包括蛋白、核酸、代谢产物等,其中核酸类肿瘤标志物主要有基因组DNA突变、mRNA表达水平等。肿瘤标志物可以在组织细胞中检测到,也可以在血清、血浆等体液中检测到。通常把可以在体液中检测到的标志物称为循环肿瘤标志物。循环肿瘤标志物检测标本的获取具有非侵入性等优点,方便疾病的动态监测,已成为临床检测的一项重要内容。目前临床上已经应用的循环肿瘤标志物虽然数量较多,但其在肿瘤早期诊断中仍存在一定的局限性。近年来研究者们在肿瘤患者血液中发现了一些从肿瘤原发部位或转移部位脱落的肿瘤细胞,这些循环肿瘤细胞在一定程度上能够反映其来源肿瘤信息,在肿瘤的检测中具有重要的意义。但是循环肿瘤细胞在循环体系中含量较少并且异质性高,这成为其临床应用的一个难点。而随着分子生物学的发展,研究者们在血液等体液中还发现了循环肿瘤DNA、外泌体等这样一些物质,它们携带有重要的生物信息,在肿瘤的诊断、预后分析、疗效监测中扮演着重要的角色,有望成为新型的循环肿瘤标志物。为了满足临床疾病诊断等需求,本研究分别对外泌体mRNA、血清蛋白进行研究,以寻求可用于实体肿瘤和血液系统恶性肿瘤检测的循环肿瘤标志物。本研究第一部分以急性早幼粒白血病细胞(acute promyelocytic leukemia,APL)中特有的融合基因PML-RARA为例建立APL细胞来源的外泌体中微量融合基因检测的实验方法。我们采用的是基于Taqman探针法的微滴式数字PCR技术(droplet digital PCR,ddPCR)。首先以PML-RARA阴性的髓系白血病细胞株HL60细胞RNA反转录合成的cDNA为阴性对照,建立空白检测限(limit of blank,LOB);以含长型PML-RARA的APL细胞株NB4细胞RNA反转录合成的cDNA和含短型PMLRARA的重组质粒为阳性对照,确定最低检测限(limit of detection,LOD)。实验结果显示,使用该ddPCR技术检测长型和短型PML-RARA转录本的LOB分别为每微升PCR反应体系中含0.0725拷贝和0.083拷贝;LOD分别为每微升PCR反应体系中含0.19拷贝和0.21拷贝。然后我们又进一步应用该ddPCR方法,分别对NB4细胞培养上清和APL患者血清来源的外泌体中PML-RARA融合基因转录本进行了检测。本研究成功建立了一种基于ddPCR技术的微量融合基因的检测方法,可对外泌体来源的微量PML-RARA转录本进行绝对定量,为无创动态监测APL患者血清外泌体中PML-RARA融合基因的表达水平提供了可能。本研究的第二部分对存在于血清中的分泌型翻译控制肿瘤蛋白(translationally controlled tumor protein,TCTP)作为肿瘤标志物的可能性进行了初步探究。我们采用酶联免疫吸附技术(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),分别对多种类型肿瘤患者和健康人血清样本中的TCTP蛋白进行检测,以分析TCTP蛋白水平在肿瘤患者和健康人血清中的差异性。遗憾的是由于检测技术的局限性,本研究目前尚未能对血清中TCTP的蛋白水平与肿瘤之间的关系得出结论。