【摘 要】
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该文用聚合酶链反应(PCR)从大肠杆菌K12s中分别扩增了大肠杆菌肉碱脱水酶基因caiB、肉碱消旋酶的基因caiD、肉碱代谢相关酶基因caiE.测序表明:caiB基因长1221bp,与文献报道值
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该文用聚合酶链反应(PCR)从大肠杆菌K12s中分别扩增了大肠杆菌肉碱脱水酶基因caiB、肉碱消旋酶的基因caiD、肉碱代谢相关酶基因caiE.测序表明:caiB基因长1221bp,与文献报道值相比,核苷酸序列有26个不同,衍生的氨基酸序列只有一个不同,即302位的丙氨酸变为苏氨酸;caiD基因长894bp,与已报道序列有11个核苷酸不同,翻译的蛋白有4个氨基酸相异;caiE基因长612bp,有10个核苷酸与文献不同,翻译的蛋白有6个氨基酸相异.分别构建各基因的表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),经1mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后,均可高效表达.为了获得高酶活性重组菌,该文又进行了肉碱脱水酶基因caiB或肉碱消旋酶基因caiD,与辅因子合成酶基因caiE的共表达研究.为获得大肠杆菌重组肉碱脱水酶的高产、高活力菌株及培养条件,对单独表达肉碱脱水酶和共表达肉碱脱水酶及其辅因子合成酶的基因工程大肠杆菌菌株的表达条件进行了优化.以LB为初始培养基,考察了诱导时间、诱导剂浓度、大肠杆菌宿主菌、装液量、肉碱对工程菌重组肉碱脱水酶含量及酶活力的影响.
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