“解毒活血方”对萎缩性胃炎大鼠血浆内皮素-1、血栓素B和6-酮-前列腺素F含量的影响

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目的:萎缩性胃炎是消化系统的常见病、多发病。近年来许多学者对该病进行了诸多研究和探讨,对萎缩性胃炎的诊断与治疗作出了巨大贡献。但本病尚缺乏疗效确切、副作用小的西药,而中医药辨证治疗本病具有独特的优势。解毒活血方由蒲公英、黄连、延胡索、当归、丹参等组成,为导师课题组成员研制的治疗萎缩性胃炎的方药,具有解毒活血、理气止痛的功效。经临床应用后,取得了显著疗效。本研究采用N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)法合并水杨酸钠法、热盐水法、饥饱失常法四因素法制做萎缩性胃炎大鼠模型。选用维霉素、三九胃泰及解毒活血方进行预防和治疗给药。观察大鼠胃粘膜病理形态变化,同时检测血浆内皮素-1(ET-1)血栓素B2(TXB2)和6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)的含量,从而探讨解毒活血方治疗萎缩性胃炎的作用机制。
   方法:
   健康Wistar大鼠70只,雌雄各半,随机分为5组:正常对照组、模型对照组、解毒活血方治疗组、三九胃泰对照组、维酶素对照组,每组14只。正常组大鼠每天喂基础饲料,自由饮水,蒸馏水2ml/只灌胃;其它组大鼠基础饲料喂养2天,停食1天(饥饱失常法),自由饮用浓度为160μg/ml的MNNG溶液,并用2%的水杨酸钠溶液和15%的NaCl溶液(加热至55℃)隔日交替灌胃,制作萎缩性胃炎大鼠模型。同时,解毒活血方组以51.7g生药/kg体重灌胃,每日1次;三九胃泰对照组以10g生药/kg体重灌胃,每日1次;维酶素对照组以0.99g生药/kg体重灌胃,每日1次。灌胃前后均禁食2小时。每天观察大鼠的一般情况。12周末随机抽取正常组和模型组大鼠各2只(雌雄各1只)处死,剖腹、取胃,在胃窦和胃体部各取一块组织,用10%福尔马林固定做光镜观察。光镜观察发现大鼠胃粘膜腺体萎缩,完成造模。
   最后一次灌胃后禁食24h,无菌操作剖腹取胃,沿胃大弯剪开,用冰生理盐水漂洗胃内容物,滤纸吸干,先肉眼观察胃粘膜的大体形态,再剪取胃窦部组织2块,每块约1mm3,4%多聚甲醛固定,逐级酒精脱水,常规石蜡包埋,切片,用HE染色,光镜下观察胃粘膜病理形态学变化。取一次性5ml空针吸取消炎痛-EDTANa2液约0.2ml,快速取血3ml,即刻在空针内颠倒混匀。注入试管内,4℃离心3500mm,15min,分离血浆,放-20℃保存。断头取血2ml,置于含7.5%EDTA二钠30μl和抑肽酶40μl的试管中,混匀,4℃3000rpm离心,10min,分离血浆。
   采用平衡放射免疫法测定血栓素B2,采用非平衡放射免疫法测定6-酮-前列腺素F1α及内皮素-1的含量。
   结果:
   1、解毒活血方对萎缩性胃炎大鼠一般情况的影响
   正常组大鼠精神状态好,食量较多,皮毛光泽整齐;模型组精神状态差,进食量明显减少,皮毛杂乱无光泽;给药三组大鼠摄食、毛发等情况随给药时间增加而改善,尤其是解毒活血方组的大鼠食量明显多于除正常组之外的其余三组。实验期间,解毒活血方组、三九胃泰组和维霉素组分别死亡大鼠2只,死亡原因可能是灌胃及药物提纯等原因。
   2、解毒活血方对萎缩性胃炎大鼠胃粘膜病理形态学的影响
   大体观察,正常对照组大鼠胃粘膜色泽淡红,有光泽,被覆较多粘液,粘膜皱襞完整,走形规则,胃壁弹性良好;模型组大鼠胃粘膜色泽淡白,皱襞低平、走向紊乱甚或消失,粘膜变薄,并可见粘膜下血管显露、水肿及散在出血点;解毒活血方组大鼠胃粘膜肉眼观察与正常对照组无明显差别,显著优于各对照组;三九胃泰组和维霉素组大鼠胃粘膜有不同程度的色泽苍白,粘膜变薄,胃壁弹性减弱等表现。
   光学显微镜观察,正常对照组胃粘膜上皮完整、腺体排列规则,粘膜肌层较薄。模型对照组上皮不完整,多数腺体结构排列紊乱,粘膜腺体有不同程度的萎缩或消失,粘膜变薄或糜烂,粘膜肌层增厚,并向固有层延伸。解毒活血方组胃粘膜上皮相对完整,粘膜厚薄较为均匀,腺体排列较规整,充血明显减轻。三九胃泰组粘膜肌层相对较薄,萎缩的腺体数目较少,有少量充血。维霉素组粘膜肌层增厚,腺体萎缩较多。
   3、解毒活血方对萎缩性胃炎大鼠血浆血栓素B2和6-酮-前列腺素F1α含量的影响
   与正常组比较,模型组大鼠的TXB2的含量升高,具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,中药组、三九胃泰组及维霉素组大鼠的TXB2的含量均有不同程度的下降,具有统计学意义(P<0.05);中药组与三九胃泰组及维霉素组比较,TXB2的含量显著降低,具有统计学意义(P<0.05)。
   与正常组比较,模型组大鼠的6-Keto-PGF1α的含量降低,具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,中药组、三九胃泰组及维霉素组大鼠的6-Keto-PGF1α的含量均有所升高,具有统计学意义(P<0.05);中药组与三九胃泰组及维霉素组比较,6-Keto-PGF1α的含量显著升高,具有统计学意义(P<0.05)。
   4、解毒活血方对萎缩性胃炎大鼠血浆内皮素-1含量的影响
   与正常组比较,模型组大鼠的ET-1含量明显升高,具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,中药组、三九胃泰组、维霉素组大鼠的ET-1含量均降低,具有统计学意义(P<0.05);中药组与三九胃泰组及维霉素组比较ET-1含量显著降低,具有统计学意义(P<0.05)。
   结论:
   1、解毒活血方能改善萎缩性胃炎大鼠胃粘膜腺体的萎缩情况及排列结构,使胃粘膜上皮相对完整,减轻胃粘膜的充血,具有保护胃粘膜的作用。
   2、解毒活血方可降萎缩性胃炎大鼠血栓素B2的含量,升高6-酮-前列腺素F1α的含量,从而增加大鼠胃粘膜血流量,改善胃粘膜的血瘀状况。
   3、解毒活血方降低萎缩性胃炎大鼠内皮素-1的含量,从而改善微循环,使胃粘膜局部缺血缺氧得到改善,有利于炎症的吸收以及萎缩腺体的恢复,从而减轻胃粘膜损伤度,保护了胃粘膜。
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