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背景和目的泛发性脓疱性银屑病(generalized pustular psoriasis, GPP)是一种炎症性疾病,发病机制尚不清楚。近年研究发现白介素36受体拮抗剂基因(interleukin-36receptor antagonist gene, IL36IRN)和细胞凋亡募集结构域蛋白14基因(caspase recruitment domain-containing protein14, CARD14)突变与GPP的发生有关。IL36RN及CARD14基因突变位点及突变发生率随地域、种族、寻常型银屑病(psoriasis vulgaris, PV)伴发情况不同而有差异。治疗GPP的系统用药有维A酸类药物、免疫抑制剂、生物制剂、中成药如雷公藤多甙等。阿维A治疗GPP有效率达79.4%,而环孢素A、甲氨蝶呤的有效率接近60%。目前中国GPP患者IL36RN及CARD14基因突变情况还未得到很好阐明,突变患者与未检测到突变患者临床表现及治疗方案是否存在差异尚待进一步研究。本课题对中国GPP患者进行外周血IL36RN及CARD14基因全外显子及侧翼序列突变检测及对照分析,以了解两个基因在GPP患者中的突变情况及差异；对IL36RN的基因型和临床表型(发病年龄、家族史、病情严重程度、PV伴发情况)进行相关性分析；分析不同突变组(明确致病突变、可疑致病突变、未检测到突变)GPP患者临床特点和差异；进一步用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)法检测并比较突变患者与未检测到突变患者血清白介素-36(interleukin-36, IL-36)、白介素-36受体拮抗剂(interleukin-36receptor antagonist, IL-36Ra)表达水平差异。研究方法1、收集61例GPP患者的临床资料和外周血标本,采用多聚酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)方法扩增IL36RN及CARD14基因全部外显子及其侧翼序列并进行Sanger测序,在48例PV患者及186例正常对照者中对上述基因突变位点进行扩增及测序并与GPP患者进行对照、分析。2、收集61例GPP患者和48例PV患者及186例正常对照的IL36RN突变位点基因分型资料,并按发病年龄、家族史、病情严重程度及PV伴发情况对GPP患者进行临床表型分组,采用χ2检验比较各组间基因型和等位基因频率的分布差异；根据基因检测结果将患者分为明确致病突变组、可疑致病突变组及未检测到突变组,采用非参数检验比较各组间临床表型(发病年龄、发病时白细胞计数、超敏C反应蛋白值、血沉值、疗效)差异,并对各组患者特有的临床特点进行总结。3、对2例发生IL36RN c.115+6T>C纯合突变患者、2例未发生IL36RN突变患者脓疱皮损和1例无IL36RN c.115+6T>C突变的健康人皮肤组织行反转录PCR (reverse-translation polymerase-chain reaction, RT-PCR)反应并测序。4、用ELISA法检测45例GPP患者和34例PV患者及37例健康对照者血清IL-36、IL-36Ra表达水平,比较突变与未突变GPP患者间上述细胞因子表达差异。结果1、IL36RN c.115+6T>C突变(明确致病突变+可疑致病突变)在GPP患者中发生率为52.5%；CARD14基因突变在中国GPP患者中未检出。2、GPP组患者IL36RN c.115+6位点的基因型和等位基因分布与对照组(P值分别为6.94X10-21,1.30X10-36)、PV组(P值分别为1.67X10-9,3.54X10-14)均有显著性差异,而PV组与对照组的基因型及等位基因分布无明显差异(P值均为0.69)；儿童发病组与成人发病组GPP患者IL36RN c.115+6位点的基因型和等位基因分布无显著性差异(P值分别为0.35,010)；GPP轻度组与中度组比较基因型和等位基因分布均无显著差异(P值分别为0.42,0.36),中度组与重度组比较等位基因分布差异有显著性(P=0.04),基因型分布差异无显著性(P=0.29),轻度组与重度组比较基因型和等位基因分布均有显著性差异(P直分别为0.04,0.001)；GPP单独发病组与GPP合并PV组IL36RN c.115+6位点基因型和等位基因分布均存在显著差异(P值分别为3.70X10-6,8.18X10-10)。IL36RN明确致病突变组、可疑致病突变组与未检测到突变组患者之间发病年龄、WBC、疗效无显著性差异(P值分别为0.759,0.07,0.26)；明确致病突变组hsCRP、ESR水平高于未突变患者(P值均为0.001)；采用阿维A或雷公藤多甙等治疗时,突变与未突变患者疗效无差异。3、2例IL36RN c.115+6T>C纯合突变GPP患者皮损RT-PCR扩增产物大小均为350bp,其mRNA表达不完整,外显子3缺失；2例无IL36RN c.115+6T>C突变的GPP患者及1例健康人皮肤组织RT-PCR扩增产物大小为450bp,其mRNA表达完整。4、IL-36及IL-36Ra在GPP组、PV组和健康对照组之间表达无差异；GPP突变组IL-36β显著高于健康对照组,GPP突变组IL-36Ra水平显著低于未突变组及健康对照组；GPP脓疱发作期及重度GPP患者血清IL-36β,γ表达水平显著高于健康对照组；脓疱发作期突变组患者IL-36Ra水平显著低于未突变组及健康对照组；血清IL-36β与IL36-γ水平在GPP组患者中呈高度正相关,两者均与GPP病情严重度呈低度正相关。结论1、IL36RN c.115+6T>C突变在中国GPP患者中发生率为52.5%；CARD14基因突变与中国患者GPP的发病可能无关。2、IL36RN c.115+6T>C突变与GPP患者发病年龄、家族史无关,与病情严重程度及PV伴发情况有关；IL36RN突变GPP患者可能比未突变患者病情严重,但两者疗效无差异；与GPP合并PV者相比,GPP单独发病者更易发生IL36RN c.115+6T>C突变。3、IL36RN c.115+6T>C突变可引起中国GPP患者IL36RN mRNA异常剪切,是明确致病突变。4、IL36RN突变可导致GPP患者IL-36p水平升高,IL-36Ra水平降低,且在脓疱发作期更为显著；血清中IL-36β、γ及IL-36Ra均参与GPP的发病过程。