研究背景：海水淹溺性急性肺损伤（Seawater aspiration-induced acute lung injury, Seawateraspiration-induced ALI）是海水淹溺后的严重并发症。不可控性的炎症反应是海水淹溺性ALI的主要发病机制，同时海水有着其特殊的理化因素及细胞外液的高渗性。JAK/STAT1是炎症反应中的重要信号转导通路，在诱导上皮细胞凋亡中也起到重要作用，同时JAK，STAT1又能够被细胞外液的高渗环境激活，因此，我们考虑JAK/STAT1通路可能在海水淹溺性ALI炎症反应及上皮细胞凋亡中起到重要的作用。表没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallocatechin-3-gallate，EGCG）是绿茶中儿茶素的主要活性成分，是STAT1的抑制剂。近年来大量文献报道EGCG具有抗肿瘤抑制肿瘤生长及转移的作用，除此以外在糖尿病，帕金森，老年痴呆等疾病中都有较好的疗效。研究表明EGCG能够通过抑制STAT1的活性，降低心肌细胞缺血再灌注损伤，而EGCG在肺损伤特别是海水淹溺性ALI中会起到什么样的作用，有待我们进一步研究。研究目的：1.观察EGCG对海水淹溺性ALI炎症反应及上皮细胞凋亡的作用；2.探讨JAK/STAT1通路在海水淹溺性ALI发病中的作用；3.探讨EGCG保护海水淹溺性ALI的作用机制。研究意义：通过离体及活体实验，探讨EGCG保护海水淹溺性ALI的作用机制，明确JAK/STAT1通路在海水淹溺性ALI发病中的作用机制，为海水淹溺性ALI的治疗提供新的思路。实验方法：1．动物实验（1）雄性SD大鼠（180-220g），暴露气管并气管内滴注配方海水4ml/kg建立海水淹溺性ALI模型。随机分为五组：正常组（n=8），海水损伤后1小时组（n=8），3小时组（n=8），6小时组（n=8），12小时组（n=8）。分别在致伤后1,3,6,12小时检测动脉血氧分压，IL-1，IL-10，TNF-α炎症因子含量，PCR检测JAK，STAT家族各成员的mRNA，Western blot检测STAT1，P-STAT1的蛋白含量。并进行组织病理学检测。（2）雄性SD大鼠（180-220g）。随机分为四组：①正常组：暴露气管并术前半小时腹腔注射1ml生理盐水（n=12）；②EGCG组：暴露气管并术前半小时腹腔注射10mg/kg EGCG溶于1ml生理盐水中（n=12）；③海水组：暴露气管后气管内滴注配方海水4ml/kg并致伤前0.5小时腹腔注射1ml生理盐水（n=12）；④海水+EGCG组：暴露气管后气管内滴注配方海水4ml/kg并致伤前0.5小时腹腔注射10mg/kgEGCG溶于1ml生理盐水中（n=12）。于致伤后0-3小时动态观察动脉血氧分压变化，致伤后6小时检测肺干湿重比，肺泡灌洗液蛋白含量，IL-1，IL-10，TNF-α炎症因子含量，PCR检测STAT1mRNA含量，Western blot检测STAT1，P-STAT1，caspase-3，P21的蛋白含量，荧光TUNEL，免疫组化，电镜观察肺组织超微结构及组织病理学检测。2．细胞实验（1）培养NR8383细胞，指数生长期的NR8383细胞无血清饥饿16小时后，分为四组：正常组，EGCG组（10цM EGCG干预细胞），海水组（30%海水干预细胞），海水+EGCG组（10цM EGCG干预细胞后0.5小时再给予30%海水干预细胞）。海水干预6小时后取细胞上清液检测IL-1，IL-10，TNF-α炎症因子含量，PCR检测JAK1，JAK2，STAT1的mRNA含量，Western blot检测JAK1，P-JAK1，JAK2，P-JAK2，STAT1，P-STAT1含量。（2）培养A549细胞，指数生长期的A549细胞无血清饥饿16小时后，分为两步实验：第一步用不同浓度海水干预细胞，分为五组：正常组，10%海水组，20%海水组，30%海水组，40%海水组，干预细胞后6小时流式细胞术检测细胞凋亡程度；第二步用EGCG干预细胞，分为四组：正常组，EGCG组（10цM EGCG干预细胞），海水组（30%海水干预细胞），海水+EGCG组（10цM EGCG干预细胞后0.5小时再给予30%海水干预细胞），干预细胞后6小时流式细胞术检测细胞凋亡率。实验结果：1．海水淹溺性ALI在6小时损伤最重，STAT1在损伤后1小时即升高6小时表达量达最高值。造模成功后检测组织病理学，动脉血氧分压，炎症因子，蛋白表达量指标，结果显示组织病理学检测肺组织明显水肿，炎细胞浸润，随着时间延长肺损伤程度逐渐加重，在6小时点肺损伤程度最重。致伤后出现明显低氧血症。IL-1，TNF-α促炎因子明显升高，IL-10抑炎因子明显下降，差异具有统计学意义（P<0.05）。STAT1蛋白表达量在损伤后1小时开始升高6小时达最高，此后开始下降。2．在体内实验中EGCG预处理能够减轻肺组织炎症并抑制肺组织细胞凋亡。通过体内实验观察组织病理学，动脉血氧分压，肺含水量，炎症因子，蛋白表达量，凋亡，超微结构等指标明确EGCG对海水淹溺性ALI的保护作用。结果显示EGCG预处理组能够减轻海水淹溺性ALI导致的低氧血症，差异具有统计学意义（P<0.05）；减轻肺水肿，降低肺泡灌洗液蛋白含量，差异具有统计学意义（P<0.05）；降低IL-1，TNF-α促炎因子，升高IL-10抑炎因子，差异具有统计学意义（P<0.05）；Western及免疫组化结果均显示能够降低STAT1，P-STAT1蛋白的表达量；Western结果显示能够降低STAT1下游P21及caspase-3的蛋白表达量；荧光TUNEL结果显示能够减少组织细胞凋亡；电镜观察肺组织超微结构及组织病理学检测均显示能够减轻肺水肿，炎细胞浸润程度。3.在离体实验中EGCG预处理能够减轻NR8383细胞炎症反应并抑制A549细胞凋亡。通过离体实验观察炎症因子，蛋白表达量，流式检测细胞凋亡率指标明确EGCG在离体细胞中对炎症反应及细胞凋亡的影响。结果显示EGCG预处理能够减轻海水干预NR8383细胞的炎症反应，降低IL-1，TNF-α促炎因子，升高IL-10抑炎因子，差异具有统计学意义（P<0.05），降低P-JAK1， P-JAK2，STAT1，P-STAT1的蛋白含量，对JAK1，JAK2总蛋白含量无明显影响。用不同浓度海水干预A549细胞后显示随着海水浓度的升高A549细胞的凋亡率升高（P<0.05），EGCG预处理后可以降低海水干预后引起A549细胞的凋亡率（P<0.05）。结论：1.海水淹溺性ALI中STAT1表达明显升高，且STAT1的激活与海水淹溺性ALI的损伤程度相关。2. EGCG能够减轻海水淹溺性ALI中肺组织炎症反应，减轻肺水肿及血管通透性，这与其负调节JAK/STAT1通路有关。3. EGCG能够减轻海水淹溺性ALI中肺泡上皮细胞的凋亡，这与其负调节JAK/STAT1通路及凋亡蛋白caspase-3，P21有关。