【摘 要】
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胡杨(Populus euphratica Oliv.)是抗旱耐盐性较强的高大乔木,前人的研究表明耐盐植物能在高盐条件下生存与质膜H+-ATPase的功能密切相关。本文以胡杨为材料,根据已发表的根
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胡杨(Populus euphratica Oliv.)是抗旱耐盐性较强的高大乔木,前人的研究表明耐盐植物能在高盐条件下生存与质膜H+-ATPase的功能密切相关。本文以胡杨为材料,根据已发表的根据GenBank数据库中Phaseolus vulgaris,Lupinus albus,Populus alba,Prunus persica,Sesbania rostrata等物种质膜H+-ATPase核苷酸序列及胡杨质膜H+-ATPase的EST(GenBankAcc:DY666639)设计引物,通过RT-PCR、3’RACE和5’RACE技术获得其cDNA全长。通过序列分析可知,全长3 210 bp,含有一个2 862 bp的开放阅读框,其5’UTR为98 bp,3’UTR为250 bp,编码一个等电点为6.19、分子量为104 553 Da由953个氨基酸组成的蛋白。该蛋白是一个跨膜蛋白,含有10次跨膜结构,其N端和C端均位于细胞质侧。Southern杂交表明,胡杨质膜H+-ATPase基因为多拷贝或具有同源性较高的多基因家族。分别以大肠杆菌和酵母菌为受体细胞,进行了转化及表达重组蛋白的研究,并在此基础上进行了重组蛋白的纯化和功能的研究。另外,将PePMA构建到组成型启动子控制下的酵母表达载体AINEl81中,转化H+-ATPase PMAI的酵母突变株RS-72,进行酵母质膜H+-ATPase功能互补实验,结果显示已克隆的胡杨质膜H+-ATPase基因PePMA能够互补酵母的质膜H+-ATPasePMAl基因功能,证明了PePMA编码的蛋白具有质膜H+-ATPase活性。
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