类芽孢杆菌PLD-01产抗菌素发酵条件的研究

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本论文主要研究了抗菌素PLD-01的分离和鉴定、液体发酵条件、对小鼠的急性和亚急性毒性试验以及在果汁饮料中的应用。研究内容主要包括四个方面:1.类芽孢杆菌PLD-01菌株的分离和鉴定本论文是从大熊猫粪便中分离得到了几株有较强抗菌作用的菌株,选择其中产抑菌圈直径最大的1株菌株PLD-01,该菌株是一种具有较广抗菌谱的细菌。观察其菌落形态,提取其16S rDNA序列,将16S rDNA序列在网站中进行同源性比较,利用RDPⅡ数据库的Phylip Inter-face构建系统进化树,结果发现与Paenibacillus cookii具有较高的同源性,表明菌株PLD-01与类芽孢杆菌的亲源关系最近。将PLD-01确定为类芽孢杆菌。2.响应面优化PLD-01产抗菌素发酵条件的研究通过单因素、正交和响应面试验,对抗菌素PLD-01发酵条件进行了试验研究。使用Minitab 15软件进行响应面数据分析和作图,研究了菌种培养基组成因素和发酵条件因素对抗菌素PLD-01产抑菌物质量的影响。试验结果表明:PLD-01的最佳培养基为葡萄糖1%、大豆粉2%、KH2PO4为无机盐。PLD-01的最优培养条件为温度36℃、发酵液pH7、摇床转速179 r·min-1。3.抗菌素PLD-01对小鼠的急性和亚急性毒性试验本章研究了抗菌素PLD-01对小鼠的急性毒性和亚急性毒性试验。试验结果表明,经不同剂量抗菌素PLD-01处理后,受试小鼠的进食、饮水、运动等行为均未受到影响,即无明显中毒现象,也未出现死亡,动物皮毛光亮,肉眼观察主要脏器心、肝、脾、肺、肾等均未见异常改变。表明PLD-01对小鼠的急性经口毒性属于“无毒”级。在亚急性毒性试验中,试验组与对照组小鼠在增重、脏器系数、血相指标和生理生化指标上无显著差异,说明类芽孢杆菌在该剂量范围内是安全的。4.抗菌素PLD-01在果汁饮料中的应用通过纸片法,利用测量抑菌圈直径对抗菌素PLD-01的抑菌效果进行评估,并列出了其对几种常见动物病原菌的抑菌图谱。试验显示类芽孢杆菌对病原菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和普通变形杆菌等)具有广谱抑菌效果,同时对有益菌(嗜酸乳杆菌、乳双歧杆菌、长双歧杆菌)并无明显的抑制作用。将抗菌素PLD-01应用于果汁饮料中,初步检测了其在饮料中的抑菌效果。实验结果表明:抗菌素PLD-01处理组的饮料新鲜程度明显高于空白对照组,说明PLD-01发酵液对新鲜饮料的保鲜效果良好。当抗菌素PLD-01添加量为1%和5%时,橙汁和葡萄汁饮料在室温和冷藏条件下都可以保藏到第7天。室温下通过感官评价发现1%添加量分数最高,因此选择1%添加量为抗菌素PLD-01的最佳添加量。
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