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14-3-3蛋白家族是一类广泛存在于真核细胞中高度保守的调控蛋白,通过结合磷酸化位点调节配体蛋白功能,参与一系列信号转导,包括控制新陈代谢,激素信号调节,细胞分化及生物与非生物应激反应。越来越多的研究表明14-3-3蛋白在植-病互作中有免疫应答的功能。本实验室在前期的研究中,从不同耐受TMV侵染的烟草品种中筛选出一个表达显著差异的14-3-3-like C蛋白,为了探究其在抗逆过程中的生物学功能,进行了以下研究:(1)14-3-3-like C蛋白的生物信息学分析及亚细胞定位从烟草叶片中分离克隆得到的14-3-3-like C基因,并对其进行了生物信息学分析,结果显示,该蛋白cDNA全长为1027bp,编码260个氨基酸,该蛋白的分子量为58.26kDa,二级结构主要以α螺旋与无规则卷曲构成,具有典型14-3-3蛋白的特征。与烟草中14-3-3蛋白序列比对结果显示,该基因与14-3-3-C1型蛋白最接近,亚细胞定位显示该蛋白在烟草细胞膜和细胞核中均有分布。(2)酵母双杂交技术筛选互作蛋白利用酵母双杂交技术筛选出了与14-3-3-like C互作的两个蛋白,测序和比对结果显示,这两个蛋白分别为60S核糖体蛋白L22-like和转录突变体X2蛋白。(3)获得了 14-3-3-like C基因的RNAi沉默转基因烟草植株构建了 14-3-3-like C蛋白基因抑制表达载体pRNAi-14-3-3,以农杆菌为媒介侵染烟草叶片,得到了转基因烟株F0代。(4)qPCR检测14-3-3-like C基因的抑制对光合系统及抗性相关基因的影响qPCR检测两个与14-3-3互作蛋白,结果显示60S核糖体L22-like和转录突变体X2基因表达量明显下调。检测转基因植株中TMV抗性基因N与蛋白病程相关PR1-a基因表达水平下调;实验室前期蛋白组实验中筛选的抵御TMV的靶标分子,光合途径相关基因PetD、PsbA、PsaA、short-chain dehydrogenase TIC 32、Geranylgeranyl diphosphate reductase、oxygen-evolving enhancerprotein 1,对这些基因表达水平检测,结果显示光合途径相关基因PetD、PsbA、PsaA 显著下调,short-chain dehydrogenase TIC 32、Geranylgeranyl diphosphate reductase、oxygen-evolvingenhancerprotein 1也表达下调;表明 14-3-3-like C 蛋白基因表达水平影响光合作用,推测该蛋白与TMV侵染耐受性相关。