【摘 要】
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视黄醇结合蛋白(retinol binding protein,RBP)是体内将维生素A运载至靶组织的一种具有高度特异性的运载蛋白,属于疏水小分子蛋白,是由184个氨基酸组成、分子量为21KD的单一
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视黄醇结合蛋白(retinol binding protein,RBP)是体内将维生素A运载至靶组织的一种具有高度特异性的运载蛋白,属于疏水小分子蛋白,是由184个氨基酸组成、分子量为21KD的单一肽链蛋白质分子。本实验运用基因工程的方法首先在大肠杆菌中实现RBP的原核表达,但是经SDS-PAGE电泳检测发现RBP都以包涵体形式存在,而包涵体是没有生物学活性的,需要进一步对它进行处理才能获得具有生物活性的重组蛋白,而分离包涵体的步骤非常复杂,且目前仍没有适用各种表达产物的通用方法,因此在第二部分的实验中构建了RBP的真核表达载体pPIC9—RBP,将其转化受体毕赤酵母GS115,通过SDS—PAGE电泳筛选表达工程菌株,实现了RBP的真核表达。在本实验的最后一部分,通过免疫共沉淀和Western印迹的方法来研究视黄醇结合蛋白与其它蛋白质的相互作用,寻找与RBP有相互作用的蛋白质,从而为了解视黄醇转运和吸收机制以及相关疾病的发生、发展提供线索。
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