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1目的青天葵来源于兰科植物毛唇芋兰Nervilia fordii (Hance) Schltr的叶或带块茎的全草。主要产地为广西、广东、海南,在云南、四川、贵州也有分布。在广东、广西、港澳及东南亚等地较为常用,出口量比较大,价格十分昂贵。青天葵具有清热润肺、解毒散瘀的功效,主要治疗肺痨、痰火咳血、瘰疬、肿毒、跌打损伤、小儿疳积、精神病、口腔炎、急性咽喉炎等疾病。青天葵种子无胚乳,仅靠无性繁殖,自然繁殖数量少,每株植物每年只繁殖一个球茎,每个球茎上只长一片叶子,繁殖系数极其低。另一方面,由于青天葵仅适宜在石灰岩地区潮湿、有荫蔽的环境下生长,青天葵资源分布极其有限。长期以来,群众乱采乱挖,多是连叶带球茎采挖加工,导致野生青天葵资源日益枯竭,远远不能满足市场需求。现如今药用植物资源紧缺情况加剧,药用植物多倍体的新品种具有质量优良、产量高以及高度抗逆性等特征,在生产实践中逐渐得到重视。当前生态环境遭到严重的破坏,药用植物栽培品种的品质逐步退化,野生药用植物资源日益减少,以致枯竭。加强青天葵快速繁殖,可以形成成熟的技术来提供青天葵药材,有利于解决种质紧缺的问题,为打破青天葵资源贫乏濒危的瓶颈,进一步实现工业化大生产打下基础；多倍体培育诱导技术应用于药用植物具有深远的意义。药用植物大多以根、茎和叶等器官为收获对象,当药用植物植株的染色体加倍后,根、茎、叶巨型化,较好地满足了药材生产的要求,药用植物的倍性变化往往同时能导致其次生代谢产物含量的变化,这就有可能得到药物有效成分含量更高的药用植物新品种。青天葵快速繁殖及多倍体成功诱导能够达到药材速生、优质、高产育种的目标。2方法2.1采用正交设计法,在MS培养基中分别附加6-BA(2.0、2.5、3.0mg/L), PP333(1.5、2.0、2.5mg/L),KT (1.0、1.5、2.0mg/L),考察激素对根状茎鲜重增长的影响；在上述优化培养基的基础上分别附加苹果汁(50、100、150、200g/L)和酵母膏(0.5、1.0、1.5、2.0g/L),考察天然添加物对根状茎鲜重增长率的影响；青天葵通过根状茎诱导可以产生许多球茎以达到快速繁育的目的。实验采用正交设计法,考察NAA (0、0.1、0.2mg/L),IBA(0、1.0、2.0mg/L),活性炭浓度(1.0、2.0、3.0g/L)及光照条件对青天葵球茎生成的影响。2.2通过比较自然条件和组培条件下以及根状茎和球茎的诱导率,比较浸泡法和琼脂法的优劣,以此来筛选青天葵多倍体材料和诱导方法。利用正交设计法考察秋水仙素浓度(200、300、400、500mg/L),秋水仙素作用时间(28、21、14、7d),DMSO浓度(0、10、20、40ml/L),KT浓度(0、1.0、2.0、4.0mg/L)对青天葵多倍体诱导率的影响。采用形态学、细胞学、染色体法对处理后的植株进行鉴定。3结果3.1添加激素优化增值培养基为：MS+2.0mg/LKT+1.5mg/LPP333+2.5mg/L6-BA,青天葵根状茎鲜重增长率达到702.84%,根状茎生长良好；添加天然添加物优化增值培养基为：MS+2.0mg/LKT+1.5mg/LPP333+2.5mg/L6-BA+150g/L苹果汁,鲜重增长率达到830%；青天葵再生球茎生成个数最多的培养基为：MS+0.2mg/L NAA+1.0mg/LIBA+1.0g/L活性炭+光照条件,平均达15个；青天葵再生球茎生成直径最大的培养基为：MS+0.1mg/LNAA+2.0mg/LIBA+2.0g/L活性炭+黑暗条件,平均直径达24.89mm。3.2选用琼脂法并用300mg/L秋水仙素、10ml/LDMSO和2.0mg/LKT处理组培根茎28d,青天葵多倍体的诱导率可达到50%,诱导效果较好。所得的多倍体植株外部形态表现出巨型化,多倍体植株叶片的长、宽以及植株高分别是二倍体的152.17%、158.67%、60.90%。经细胞形态学鉴定,处理后的叶片表皮细胞气孔长度、宽度、气孔密度、叶绿体数目分别是未经过处理的叶片表皮细胞气孔大小的138.46%、153.00%、59.09%、109.09%。经染色体鉴定,所得四倍体数(约40)是二倍体染色体数目(约20)的2倍,可以确定所得植株为青天葵四倍体植株。4结论本研究开展青天葵根状茎增殖及球茎生成研究,成功建立了青天葵的扩繁体系。对青天葵进行多倍体诱导和鉴定,成功获得多倍体植株,为改良青天葵现有品种,丰富青天葵遗传育种资源,深入开展青天葵良种选育等研究奠定基础。