论文部分内容阅读
目的：癫痫是一组由大脑神经元异常放电所引起的短暂中枢神经系统功能失常为特征的脑部慢性疾病，具有长期反复发作的特点，近来在不同的癫痫模型和人类癫痫灶的形态学研究中发现有进行性神经元丢失，胶质细胞增生和突触重组等神经可塑性变化。癫痫形成过程中脑的可塑性变化成为近年来研究的热点。目前点燃现象(kindling)已作为研究癫痫形成和脑可塑性变化的理想模型。生长相关蛋白(growth associated protein，GAP-43)是一种神经元特异性胞膜磷酸蛋白，主要分布于轴突生长锥质膜和突触前末端，与神经系统生长发育、再生、轴突生长和突触重组密切相关，对GAP-43的检测可以反应轴突的生长及突触的形成。巢蛋白(nestin)是一种新发现的中间丝蛋白，生理情况下成年脑内nestin阳性细胞出现于室管膜上皮和脑室下区及齿状回，病理情况下星形胶质细胞(astrocyte，AST)表达nestin，nestin作为星形胶质细胞活化的一个敏感指标能准确地反应其机能状态。妥泰(topiramate，TPM)是一种新型抗癫痫药物，是自然态单糖基右旋果糖的硫化物，可通过多种机制产生抗癫痫作用。天眩清为中药材天麻的有效成分天麻素，在体内水解成天麻苷元透过血脑屏障，增强γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid，GABA)A受体的亲合力而具有抗癫痫作用。用戊四氮点燃大鼠模型同时对海马中GAP-43和nestin的表达进行研究，国内外未见报道。TPM及天眩清是否具有抗癫痫形成作用，在抗癫痫形成过程中是 郑州大学2004年研究生毕业论文妥泰及天眩清对戊四氮点燃大鼠海马GAP一3和nestin表达的影响否对GAP一43和nestin的表达产生影响，亦未见报道。 本课题拟在建立大鼠戊四氮(pentylenatetrazol，PTZ)点燃模型的基础上，观察TPM及天眩清治疗对大鼠行为，脑电图(eleetroencePhalograph，E EG)及脑内G妙一43和nestin表达水平的影响，以探讨这两种药物的抗癫痈形成作用及其对脑突触重组和胶质增生的影响。 方法:将40只健康成年雄性SD大鼠随机分为4组，每组10只。I组为生理盐水对照组，n组为点燃组，m组为TPM治疗组，W组为天眩清治疗组。点燃组腹腔注射PTZ35m叭g(质量容积比为3.smFkg)前lh胃管内注入生理盐水IOml/kg:TPM组于腹腔注射PTZ35m叭g前lh胃管内注入妥泰片roomg/kg(质量容积比为10ml瓜g);天眩清组于腹腔注射PTZ35m叭g前lh胃管内注入天眩清注射液100m眺g(质量容积比为loml吨);对照组于胃管和腹腔内分别注入loml/kg和3.5m掀g的生理盐水，间隔lh。均每日1次，于上午8:00一10:oo完成。妥泰及天眩清连用4W。点燃组于达到点燃标准后取4只大鼠作EEG，其他各组于4W后各取4只作脑电图。最后一次注射PTZ后6h处死大鼠，常规方法灌注固定，制作脑组织蜡块及石蜡切片。用免疫组化方法显示各组动物脑切片GAP一3和nestin表达的变化，并用HPIAS一1 000多媒体病理图文分析系统对其定量。 结果:点燃组平均于28天左右达点燃标准;TPM和天眩清组病性发作显著减轻，无一例达点燃标准;对照组行为正常，无痈性发作。点燃组脑电图表现出典型的高波幅棘慢波;TPM组和天眩清组痈样放电明显受抑制;对照组无痈样放电。各组海马结构内G妙一43免疫反应产物呈板层样分布，多为点状或颗粒状沉积于神经毯内，血管、白质、神经元及胶质细胞不染色。点燃组，TPM组和天眩清组海马结构内G妙一43免疫反应产物分布特征无明显改变，但免疫反应产物密度普遍提高，定量结果显示:点燃组海马CA3区苔鲜纤维层，齿状回颗粒细胞层，齿状回分子层内带GAP43免疫反应产物COD值与对照组相比显著增加(P<0.05)，而TPM及天眩清组与对照组相比无显著差别印>.05)。对照组海马CAI区隐约可见散在的nestin阳性星形胶质细胞，着色较浅，突起细小;妥泰组可见nestin阳性的星形胶质细胞增生，郑州大学2004年研究生毕业论文妥泰及天眩清对戊四氮点燃大鼠海马GAP一43和nestin表达的影响胞体小，突起长;天眩清组nestin阳性星形胶质细胞胞体变大，突起多而长;点燃组，增生肥大着色较深的星形胶质细胞突起粗长，密集并相互交错重叠。点燃组，TPM组和天眩清组海马CAI区nestin阳性星形胶质细胞与对照组比均明显增多印<0 .05)，点燃组高于TPM组和天眩清组印<0.05)。 结论:PTZ点燃模型是一种较理想的研究癫痈形成的模型，操作简单，观察方便。点燃组动物海马齿状回颗粒细胞层，齿状回内分子层及苔醉纤维层GAP一43含量较正常表达增加，海马CAI区nestin阳性星形胶质细胞增多。TPM及天眩清治疗可拮抗大鼠PTZ点燃，抑制海马GAP一43过表达和星形胶质细胞活化增生。该研究为临床用药防止癫痈形成提供了理论依据。GAP一43表达增加，一方面是点燃的结果，另一方面可能是点燃维持的分子基础。星形胶质细胞活化增生可能参与癫痈的发生与调节，并可能参与胶质瘫痕形成。