应用抗体技术发现新的肿瘤标志物

来源 :中国人民解放军军事医学科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhaoziyuan123
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人癌抗原Human Carcinoma Antigen(HCA)的鼠类同源物是epiglycanin。Epiglycanin是一类分子量比较大的糖蛋白,只表达在癌细胞上,而且与机体对肿瘤的免疫反应有关。抗epiglycanin的单克隆抗体能够特异性识别人肿瘤组织,极少或不识别人正常组织。被抗epiglycanin抗体所识别的位于人肿瘤组织的一类蛋白被命名为Human Carcinoma Antigen(HCA),HCA在人肿瘤组织或者肿瘤患者的体液中高表达。因此,肿瘤患者体内表达上调的HCA可以作为肿瘤的标志物。HCA的成分和功能未知,推测HCA为一类糖蛋白的复合物而不是一种蛋白,目前得到其抗体亚类为IgM,不能满足将来临床应用的需要。本研究中,应用从肿瘤组织和肿瘤细胞系中纯化的HCA作为免疫原免疫小鼠和大鼠,制备多样化的单克隆抗体。然后采用ELISA进行亚类测定,大部分抗体都为IgG1;ELISA方法检测所获抗体大部分与已知的五种肿瘤标志物没有交叉反应。应用Western blot检测所获得的单克隆抗体都与抗原相结合。然后用正常肝组织,肝癌组织,肝癌细胞系HepG2和前列腺癌细胞系PC3的总蛋白对获得的抗体进行Western blot的筛选,筛选出21株单克隆抗体能特异性识别肿瘤组织或肿瘤细胞系中的蛋白;应用正常肝组织,肝癌组织,前列腺炎组织和前列腺癌组织对部分抗体进行了免疫组化筛选,获得3株抗体在癌组织中具有特异性染色,应用免疫沉淀联合质谱技术鉴定其抗原,初步认定单克隆抗体BAF112识别的抗原为90K,单克隆抗体BCE075识别的抗原为AnnexinⅡ。AnnexinⅡ和90K蛋白在肿瘤组织中高表达,具有肿瘤标志物的特性。因此,本研究的路线是切实可行的,获得了具有肿瘤标志物特征的抗原。随着抗体的进一步鉴定,相信有越来越多的肿瘤标志物会被发现。
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