目的：建立检测人载脂蛋白M（Apolipoprotein M, ApoM）的实时荧光定量PCR技术。方法：采用Primer Express Versions2.0设计引物及TaqMan探针，检测ApoM基因的表达。将扩增的ApoM基因片段纯化后与pMD19-T载体连接，克隆构建含ApoM基因片段的重组质粒，作为定量检测ApoM基因表达的标准品。结果：PCR扩增产物经测序分析证实为ApoM特异性片段。本法灵敏度为40copies/μl，线性范围为4.00×101～4.00×108copies/μl，相关系数为1.000，扩增效率E为90.5%，批间变异系数为6.38%～17.9%。结论：成功建立了检测人ApoM基因表达的实时荧光定量PCR方法，且该方法特异性好，灵敏度高。目的：由于胰岛素抵抗的病人表现为糖代谢异常，并且血浆游离脂肪酸（Freefatty acid, FFA）水平明显升高，因此，本部分的研究目的是明确FFA水平升高是否影响ApoM的表达。方法：用不同浓度棕榈酸处理人肝癌细胞株（HepG2细胞）以及经颈静脉或尾静脉给大鼠输注脂肪乳，采用Real-time PCR及PCR芯片分析FFA对ApoM表达的影响和可能的机制。结果：大鼠输注20%脂肪乳6h后，血浆FFA水平升高到对照组的17.6倍（P<0.01），葡萄糖输注率（Glucose infusion rate，GIR）下降了27%（P<0.001），大鼠肝脏ApoM mRNA水平明显下调（P<0.05）。单因素方差分析表明，0、0.25、0.5及1mM棕榈酸分别作用HepG2细胞后，组间ApoM mRNA表达水平有显著差异（P<0.01），1mM组与0mM相比，ApoM mRNA表达水平显著下降（P<0.01）。PCR芯片检测结果显示，1mM棕榈酸组三磷酸肌醇激酶（Phosphatidylinositol3-kinase，PI-3K）途径的主要组分及靶基因、丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase, MAPK）途径的主要组分及靶基因、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（Peroxisome proliferator-activated receptor gamma, Pparg）及其靶基因、固醇调节元件结合蛋白1靶基因以及与细胞周期、增殖相关基因的表达明显高于对照组；大鼠肝脏PCR芯片的检测结果也表明，输注脂肪乳后，以上几个信号途径的基因或靶基因的表达水平也显著升高。结论：FFA可能通过PI-3K和/或PPARβ/δ信号途径调节ApoM的表达，详细机制还需进一步研究。目的：明确短时输注高浓度葡萄糖是否通过游离脂肪酸途径下调载脂蛋白M。方法：经颈静脉或尾静脉给大鼠输注葡萄糖和/或罗格列酮（胰岛素增敏剂）；改良比色法检测FFA水平；HEC试验测定GIR；Real-time PCR检测ApoM mRNA水平。结果：大鼠尾静脉输注25%葡萄糖后，血浆FFA浓度显著低于输注5%葡萄糖组（P<0.001）。罗格列酮对健康大鼠血浆FFA浓度的影响无统计学差异（P>0.05）。双因素方差分析（Two-Way ANOVA）表明罗格列酮和高浓度葡萄糖对大鼠血浆FFA影响的交互作用无统计学意义（P>0.05）。葡萄糖和罗格列酮对GIR均有影响（P分别<0.0001），并且两者的交互作用具有显著意义（P<0.0001）。25%葡萄糖下调大鼠肝脏ApoM mRNA表达（P<0.05），而罗格列酮明显增高大鼠肝脏ApoM mRNA的表达（P <0.0001），但两者的交互作用不具有显著意义（P>0.05）。结论：高浓度葡萄糖和罗格列酮对ApoM的调节作用是相对独立的，且都不通过FFA途径影响ApoM mRNA的表达。具体机制有待进一步研究。目的：初步明确FFA及高浓度葡萄糖降低ApoM的机制。方法：分别用棕榈酸（1mM）和/或PI-3K抑制剂LY294002（LY,10μM）、棕榈酸（1mM）和/或蛋白激酶C抑制剂GF109203X（GFX,2μM）以及棕榈酸（1mM）和/或PPARβ/δ的拮抗剂GSK3787（10μM）处理HepG2细胞；经尾静脉给大鼠输注脂肪乳、葡萄糖和/或罗格列酮；Real-time PCR检测相关基因表达水平。结果：棕榈酸显著降低HepG2细胞ApoM mRNA水平（P<0.01），PI-3K抑制剂LY对HepG2细胞ApoM mRNA表达的影响没有显著差异（P>0.05）；双因素方差分析（Two-Way ANOVA）表明棕榈酸和LY对HepG2细胞ApoM mRNA影响的交互作用无统计学意义。GFX明显降低ApoMmRNA的表达水平（P<0.05），但GFX不影响棕榈酸降低ApoM mRNA的效应。1mM棕榈酸显著升高HepG2细胞PPARβ/δmRNA水平（P<0.001）；PPARβ/δ的拮抗剂GSK3787对ApoM mRNA表达的影响无统计学意义（P>0.05）；但能够显著抑制棕榈酸降低HepG2细胞ApoM mRNA的效应。双因素方差分析表明棕榈酸和GSK3787对HepG2细胞ApoM mRNA影响的交互作用具有统计学意义（P<0.05）。25%葡萄糖显著抑制大鼠肝脏LXRβ（P<0.001）、SHP1（P<0.0001）、LRH1（P<0.01）、ABCA1（P<0.01）、PPARβ/δ（P<0.01）基因的表达；而罗格列酮仅降低SHP1（P<0.01）及ABCA1（P<0.05）基因的表达。进一步研究发现罗格列酮显著抑制正常大鼠肝脏ABCA1mRNA的表达（P<0.05）；但在高血糖状态下，罗格列酮则明显升高大鼠肝脏ABCA1mRNA水平（P<0.01）。双因素方差分析表明罗格列酮和25%葡萄糖对大鼠肝脏ABCA1mRNA影响的交互作用具有统计学意义（P<0.001）。结论：棕榈酸通过PPARβ/δ途径下调HepG2细胞ApoM基因表达。高浓度葡萄糖有可能主要通过LRH1和/或ABCA1途径下调ApoM基因的表达。目的：探索过表达人ApoM基因是否改善胰岛素敏感性。方法：利用慢病毒（Lentivirus）为转基因载体，将人ApoM基因转入293T细胞和Goto-Kakizak（iGK）大鼠。PCR芯片分析2型糖尿病相关基因，Real-time PCR检测ApoM mRNA水平，胰岛素耐量试验评价胰岛素敏感性。结果：293T细胞过表达ApoM后，ApoM mRNA水平与ApoM阴性慢病毒组相比增加了79.43倍（P<0.001）；同时，与胰岛素抵抗相关的基因MAPK8下调了2.11倍（P<0.05）；GK大鼠经尾静脉注射5×108TU携带人ApoM基因的慢病毒后，肺组织中人ApoM mRNA表达较为明显，相当于在其自身水平上增加了3.85%。病毒注射后第14天的GK大鼠空腹血糖水平和对照组之间的差异没有统计学意义，但胰岛素耐量实验结果显示ApoM阳性慢病毒感染的GK大鼠血糖浓度下降50%的时间（60分钟）明显早于ApoM阴性慢病毒感染的GK大鼠（90分钟）。结论：过表达ApoM基因有可能增强2型糖尿病个体的胰岛素敏感性，但目前尚缺乏足够的证据支持，有必要开展进一步研究。