目的：研究人脐带间充质干细胞培养上清对正常人外周血单个核细胞（PBMC）各淋巴细胞亚群比例的影响；探究人脐带间充质干细胞培养上清对诱导活化后的PBMC杀伤肿瘤细胞功能的影响。方法:一．人脐带间充质干细胞的分离、培养和生物学特性研究。利用组织块贴壁法分离人脐带间充质干细胞并利用传代纯化筛选出能稳定传代培养的hUC-MSC；倒置荧光显微镜观察细胞形态；流式细胞术（FCM）检测hUC-MSCs的免疫表型；应用不同因子诱导hUC-MSCs向成骨细胞、成软骨细胞和脂肪细胞分化并进行鉴定。二． hUC-MSCs对正常人外周血单个核细胞（PBMC）各淋巴细胞亚群比例的影响的研究。通过密度梯度离心法分离PBMC，加入OKT3刺激，用含有hUC-MSCs培养上清的条件培养基（MSC-CM）处理PBMC， FCM分析比较处理组和对照组各淋巴细胞亚群比例以及周期的变化；Annexin V/PI双染确定PBMC的凋亡情况；ELISA法检测MSC-CM对PBMC分泌IFN-γ、IL-10的影响。三． PGE2参与hUC-MSCs对Treg亚群比例的调节并影响PBMC的增殖活性。在hUC-MSCs的培养体系中加入PGE2拮抗剂NS-398并收集培养2~3d后的hUC-MSC上清。用含此时收集的hUC-MSC上清的条件培养基作用于PBMC，作为实验组，用含未处理过的hUC-MSCs培养上清的条件培养基作用于PBMC，作为对照组1，用正常DMEM/F12培养基作用于PBMC，作为对照组2。FCM分析比较实验组和各对照组PBMC中Treg比例的变化；ELISA法检测比较实验组和各对照组PBMC分泌IFN-γ、IL-10的水平。四． hUC-MSCs上清与CIK及肿瘤细胞A549共培养体系的相互作用研究。密度梯度离心法分离PBMC，并诱导培养CIK细胞，流式细胞术检测CIK细胞免疫表型；流式细胞术检测hUC-MSCs培养上清作用后A549细胞周期的变化，MTT法检测A549细胞增殖曲线；MTT法检测hUC-MSCs培养上清对CIK杀伤A549细胞的影响。结果：成功分离得到人脐带间充质干细胞，体外培养细胞贴壁、呈长梭形，形态均一，高表达基质细胞标志CD73、CD105、CD44、CD29和黏附分子CD90，不表达CD14、MHCⅡ类分子HLA-DR和造血干细胞表面标志CD34、CD45，Gomori钙钴法、油红O染色和阿利辛蓝染色证实分离所得脐带间充质干细胞可诱导分化为成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞；MSC-CM下调了CD4+/CD8+T细胞比值，上调了PBMC中CD4+CD25+CD127lowTreg细胞的含量，而对其他淋巴细胞亚群的比例无显著影响，抑制了PBMC分泌IFN-γ的能力，但对IL-10的分泌有促进作用，此外，MSC-CM对PBMC有保护作用，降低了PBMC在OKT3刺激下的凋亡程度。抑制剂NS-398的加入使MSC-CM上调Treg的能力下降，同时也抑制了上调PBMC分泌IL-10的能力，且使PBMC分泌IFN-γ的水平得到恢复，NS398抑制试验确定了PGE2是人脐带间充质干细胞培养上清发挥免疫抑制效应的介导因子；杀伤试验证实人脐带间充质干细胞对CIK的杀伤功能具有抑制作用，且此抑制作用可能被血清中和。结论：人脐带间充质干细胞的免疫抑制效应可不依赖于与免疫细胞的直接或间接接触，并且与诱导免疫细胞凋亡无关，通过可溶性因子PGE2促进Treg细胞的增殖和活化可能是人脐带间充质干细胞发挥其免疫抑制功能的途径之一，且此种抑制效应能够降低CIK细胞对肺腺癌A549细胞的杀伤功能。