论文部分内容阅读
炎症反应(inflammatory response)是临床疾病中一种常见的现象,病毒、细菌、真菌以及外伤等均能引起机体的炎症反应。在感染性疾病早期,巨噬细胞对于病原体的抵抗和清除起着至关重要的作用。巨噬细胞能够接受病原体刺激,诱导激活并分泌炎性因子。巨噬细胞在识别外来抗原分子的表面受体和胞内免疫信号通路转导到已有较多的研究。在前期文献数据中,我们发现POM121在脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激的巨噬细胞中显著下调表达,这提示我们POM121很有可能参与LPS诱导巨噬细胞的炎症反应过程。POM121是位于核膜上的一个跨膜核孔复合体蛋白,其大小约为145 kDa。该蛋白可以分为N端跨膜区、核膜区核定位信号以及C端FG重复序列结构域。文献报道,FG重复序列在核孔的生物大分子运输中起着非常重要的作用。但POM121在巨噬细胞炎症应答中的作用以及如何发挥作用尚未明确。在本研究中,我们通过构建真核表达质粒pMSCV-eGFP-POM121,包装成逆转录病毒,感染小鼠巨噬细胞系RAW264.7,构建稳定上调表达POM121的巨噬细胞株。用LPS刺激POM121上调稳转细胞株,结果显示,和对照组细胞比较,上调表达POM121显著抑制了炎性细胞因子的表达和分泌。同时,我们通过Cas9技术,构建了POM121条件性敲除小鼠,并与Lyzm-Cre小鼠进行杂交,最终获得了髓系来源细胞特异性敲除的小鼠,体外验证结果显示敲除小鼠建立成功。体外诱导分化髓系来源POM121条件性敲除小鼠骨髓来源的巨噬细胞并用LPS进行刺激,然后检测炎性细胞因子的表达和分泌,结果表明POM121敲除后,巨噬细胞炎症反应加重。进一步,我们通过腹腔注射LPS建立小鼠脓毒血症模型。我们发现敲除小鼠比对照组表现出更强的免疫应答,表现为小鼠生存率下降,肺部病理切片病情加重以及肺脏和脾脏炎症细胞因子表达更多。为了进一步探究POM121对巨噬细胞信号通路的影响,我们检测TLR4下游NF-κB信号通路中p65和MAPK信号通路中的p38、JNK和Erk的磷酸化水平。我们的结果显示,上调POM121或者敲除POM121不影响胞质中磷酸化的p65,而上调POM121核内磷酸化p65减少,敲除POM121核内磷酸化p65增加。以上研究结果提示我们POM121可能通过抑制磷酸化的p65入核,从而抑制巨噬细胞的炎症反应。