毛细管电泳激光诱导荧光检测分析肉毒毒素A活性的研究

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本研究建立了一种快速灵敏检测肉毒毒素A活性的新方法。该方法基于肉毒毒素A的蛋白水解酶活性,采用毛细管电泳激光诱导荧光检测联用技术分离检测肉毒毒素A与其人工合成多肽底物反应后的产物来对其活性进行分析。所建立的方法能对溶液中低至0.1ng/ml的肉毒毒素进行检测(信噪比大于3),线性范围达4个数量级。并且发现在缓冲溶液中加入牛血清白蛋白能增强肉毒毒素A的活性。由于该方法需要样品量少,分析速度比传统方法快,有可能应用在肉毒毒素A药品的质量控制和肉毒抑制剂筛选等方面。肉毒毒素的毒性极强,是已知的最强神经麻痹毒素之一,美国等国家曾研究将其作为生物武器。据称,精制毒素1微克的毒力为20万只小白鼠(20克)致死量,一个人的致死量大概1微克左右。肉毒杆菌较易从自然界和受污染的食物中获得,同时肉毒毒素也有医疗用途,特别是A型毒素,是治疗神经病变导致的肌肉不自主运动性疾病的药物,2002年4月,美国FDA又批准其用于暂时性消除面部皱纹。由于肉毒毒素的强毒性与较易获得特点,美国的疾病与控制中心已将其列入六种最危险的生物恐怖威胁之一。像其它的蛋白质分子一样,肉毒毒素的活性易受环境温度,pH值等因素的影响,例如一般的食品经过高温消毒后,能有效的破坏和降低肉毒毒素的毒性。这个特点决定了对肉毒毒素的分析方法不能仅满足于确定是否存在肉毒毒素分子,而且要知道肉毒毒素的活性,只有有活性的肉毒毒素才能引起肉毒中毒。目前,对肉毒毒素活性与分型的标准分析方法为小白鼠腹腔注射法,需要几天时间,明显不能适于在紧急情况下的要求。为了及时防范肉毒毒素的生物武器攻击、生物恐怖威胁与对中毒病人的及时医治,需要发展快速的肉毒毒素活性侦检与分型新技术。
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