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新城疫（Newcastle disease,ND）是由新城疫病毒引起的禽的一种烈性、高度接触性传染病,是危害家禽养殖的主要传染病之一。目前,防治该病最有效的方法是接种ND疫苗。然而疫苗种类、接种方法及接种时间等的选择均可影响疫苗的免疫效果。鸡出壳后因免疫功能较低易受病菌感染,是雏鸡存活的关键时期。因此,提高出壳雏鸡早期的免疫保护力尤为关键。有研究表明,胚胎免疫疫苗可以提前建立对一些病毒的免疫保护力,如马立克氏病的胚胎免疫能够建立很好的免疫保护,但对于ND疫苗的胚胎免疫却达不到理想结果。因此,探索使用免疫佐剂来增强ND疫苗胚胎免疫效果,提高雏鸡早期免疫保护力具有重要意义。结合黄芪多糖（Astragalus polysaccharide,APS）具有促进生长发育和增强免疫的作用,是理想的天然免疫佐剂,本研究将APS与ND疫苗联合进行胚胎免疫,与单独ND疫苗胚胎免疫比较,既促进了雏鸡早期生长发育又增强了ND疫苗的免疫效果,从而建立了免疫保护力,为有效防控ND提供了新的免疫方法。SPF种蛋孵化至18.5日龄分别于羊膜腔内注射生理盐水（Control组）、ND疫苗（NDV组）、黄芪多糖注射液（APS组）、APS与ND疫苗混合液（APS+NDV组）,在3、7、14、21、28日龄观察APS与ND疫苗联合胚胎免疫对雏鸡生长发育、免疫功能的影响并初步探究其作用机制,并在雏鸡14日龄进行NDV攻毒保护试验,探究其对雏鸡免疫保护效果。具体研究内容及结果如下:（1）APS联合ND疫苗进行胚胎免疫对胚蛋孵化率及雏鸡生长发育的影响APS与ND疫苗联合进行胚胎免疫,明显改善了因单独胚胎免疫ND疫苗引起的胚蛋孵化率降低的问题;APS+NDV组雏鸡初重和周增重明显高于NDV组和Control组;APS+NDV组与NDV组比较,明显降低了料肉比,且优于Control组;APS+NDV组雏鸡十二指肠、空肠、回肠形态结构发育优于NDV组,增加雏鸡早期十二指肠、空肠、回肠的绒毛高度,可增加绒腺比,对隐窝深度影响不明显;APS+NDV组雏鸡脾脏、胸腺、法氏囊的器官指数高于NDV组,脾脏、胸腺、法氏囊发育优于NDV组。上述试验结果表明:APS联合ND疫苗进行胚胎免疫的方法促进了雏鸡早期的生长发育。（2）APS联合ND疫苗进行胚胎免疫对雏鸡血液及脾脏相关免疫功能影响血凝抑制试验（HI）检测结果发现,APS+NDV组14日龄雏鸡血清HI抗体滴度为6.50（log2）,28日龄抗体滴度为6.10（log2）,NDV组21日龄的抗体滴度为6.10（log2）,28日龄抗体滴度为6.00（log2）,与NDV组比较,达到相同抗体水平的时间提前1周,且维持高抗体水平时间长;ELISA方法检测雏鸡血清中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6含量发现,APS+NDV组雏鸡血清中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6含量明显高于NDV组,且两组IFN-γ、IL-2、IL-6含量在3日龄即可表现出显著,而IL-4含量在7日龄首次表现出差异显著;流式细胞术检测免疫雏鸡外周血T淋巴细胞CD4+和CD8+亚群分化情况发现,在14、21日龄,APS+NDV组CD3+CD4+T细胞百分比比NDV组升高分别约为12%和9.3%,CD3+CD8+T细胞百分比比NDV组升高分别约为10.6%和6%;淋巴细胞增殖试验检测脾脏淋巴细胞增殖发现,APS+NDV组雏鸡脾脏淋巴细胞经Con A和LPS刺激后,APS+NDV组T、B淋巴细胞刺激指数（SI）值随日龄增加而升高且始终高于NDV组;荧光定量PCR检测脾脏IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6基因mRNA表达量发现,APS+NDV组的IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6基因mRNA表达量均高于NDV组。上述试验结果表明:APS联合ND疫苗进行胚胎免疫的方法提高了雏鸡细胞免疫与体液免疫水平。（3）APS联合ND疫苗进行胚胎免疫对雏鸡肠道免疫功能的影响及TLR4信号转导通路初探荧光定量PCR检测结果表明,APS+NDV组雏鸡十二指肠与空肠IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6基因mRNA表达量比NDV组均有显著增加;ELISA检测结果表明,APS+NDV组雏鸡十二指肠、空肠和回肠洗液中s IgA水平均显著高于NDV组;免疫组化检测结果表明,APS+NDV组雏鸡十二指肠、空肠、回肠中IgA+细胞数量显著高于NDV组,同时发现APS+NDV组雏鸡的肠绒毛根部的固有层和肠腺周围有较大数量IgA+细胞分布,随着日龄增加,在肠绒毛中上部及顶部固有层IgA+细胞分布数量增多,但NDV组IgA+细胞则主要分布在绒毛根部固有层及肠腺周围;荧光定量PCR检测十二指肠与空肠TLR4、My D88、TRAF-6、NF-dB、TRIF、IRF3、IFN-βmRNA表达量发现,APS+NDV组的上述指标mRNA表达量与NDV组比均有不同程度上调。上述试验结果表明:APS联合ND疫苗进行胚胎免疫的方法提高了雏鸡肠道免疫水平,并通过上调TLR4 mRNA表达量,激活My D88和TRIF两条通路途径来调节鸡的肠道免疫应答。（4）APS联合ND疫苗进行胚胎免疫对雏鸡免疫保护效果评价APS+NDV组雏鸡的免疫保护率（83%）高于NDV组的保护率（79%）;APS+NDV组EID50值（2.76）低于NDV组（3.36）;APS+NDV组HI抗体水平（6.60）高于NDV组HI抗体水平（6.30）;APS+NDV组病毒载量明显低于NDV组;APS+NDV组雏鸡病理组织学检测未见明显病变,NDV组可见轻微病变。上述试验结果表明,APS联合ND疫苗进行胚胎免疫后,免疫保护效果优于单独ND疫苗胚胎免疫的保护效果。基于本研究结果,APS联合ND疫苗胚胎免疫与单独ND疫苗胚胎免疫比较,提前建立了免疫保护力,促进了雏鸡的生长发育并增强了ND疫苗的免疫效果,为使用中药佐剂增强疫苗胚胎免疫效果及预防新城疫提供新的思路。