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第一部分：FGFR激活对小鼠脑出血后损伤保护作用 目的：研究FGFR激动剂对小鼠脑出血后脑组织FGFR的激活及对小鼠脑出血后损伤的保护作用。 方法：雄性CD-1小鼠随机分为假手术组、PBS对照组及FGFR激动剂治疗组。 第一节，建立胶原酶诱导小鼠右基底节脑出血模型，使用 FGF2100ng或PBS在小鼠脑出血后30分钟行左侧脑室微量注射治疗，于脑出血后24小时及72小时检测小鼠神经行为功能评分并处死后检测脑水肿脑水肿。 第二节，应用胶原酶诱导小鼠右基底节脑出血模型，使用 FGF230ng、FGF1100ng或PBS在小鼠脑出血后30分钟行左侧脑室微量注射治疗，于脑出血后72小时检测小鼠神经行为功能评分并处死后检测脑水肿。 第三节，应用胶原酶诱导小鼠右基底节脑出血模型，使用 FGF2100ng或PBS在小鼠脑出血后30分钟行左侧脑室微量注射治疗，于脑出血后72小时检测小鼠脑出血量。 第四节，应用自体注血小鼠基底节脑出血模型，使用FGF2100ng或PBS在小鼠脑出血后30分钟行左侧脑室微量注射治疗，于脑出血后72小时检测小鼠神经行为功能评分并处死后检测脑水肿。 第五节，应用胶原酶诱导小鼠右基底节脑出血模型，使用 FGF2100ng或PBS在小鼠脑出血后30分钟行左侧脑室微量注射治疗，于脑出血后72小时通过检测Evans Blue在小鼠脑出血后血脑屏障的透过性评价小鼠血脑屏障通透性。 第六节，应用胶原酶诱导小鼠右基底节脑出血模型，使用 FGF2100ng或PBS在小鼠脑出血后30分钟行左侧脑室微量注射治疗，于脑出血后72小时通过western-blot方法检测FGFR磷酸化水平即FGFR激活水平。 结果：第一节，胶原酶诱导小鼠右基底节脑出血模型脑出血后24及72小时，与假手术组比较小鼠病侧基底节区脑水肿显著升高（P＜0.05）。FGF2100ng治疗组与对照组比较脑出血后72小时小鼠病侧基底节区脑水肿显著降低（P＜0.05），神经功能评分显著改善（P＜0.05）。FGF2100ng治疗组与对照组比较脑出血后24小时病侧基底节区脑水肿呈降低趋势，神经功能评分呈改善趋势，但未达到显著性差异标准（P＞0.05）。 第二节，FGF230ng治疗组与对照组比较脑出血后72小时小鼠病侧基底节区脑水肿及神经功能评分均有显著性改善（P＜0.05），但改善水平较FGF2100ng治疗组低（P＜0.05）。FGF1100ng治疗组与对照组比较脑出血后72小时小鼠病侧基底节区脑水肿明显降低（P＜0.05），神经功能评分显著改善（P＜0.05)。 第三节，脑出血后72小时，FGF2100ng治疗组与PBS对照组小鼠脑出血量无显著性差异（p=0.747）。 第四节，自体注血小鼠右基底节脑出血模型中脑出血后72小时，与假手术组比较小鼠病侧基底节区脑水肿显著升高（P＜0.05），神经行为功能损害明显（P＜0.05）。FGF2100ng治疗组与对照组比较脑出血后72小时小鼠病侧基底节区脑水肿显著降低（P＜0.05），神经功能评分显著改善（P＜0.05）。 第五节，胶原酶诱导小鼠右基底节脑出血模型脑出血后72小时，与假手术组比较小鼠病侧大脑Evans Blue透过率显著升高（P＜0.05）。FGF2100ng治疗组与对照组比较小鼠病侧大脑Evans Blue透过率显著降低（P＜0.05）。 第六节，胶原酶诱导小鼠右基底节脑出血模型脑出血后72小时，与假手术组比较小鼠病侧大脑磷酸化FGFR水平无显著改变（P＞0.05）。FGF2100ng治疗组与对照组比较小鼠病侧大脑磷酸化FGFR水平显著升高（P＜0.05）。 结论：在胶原酶诱导脑出血模型和自体注血脑出血模型中，小鼠脑出血后神经行为功能受损，血脑屏障通透性增加，脑水肿升高。FGFR激动剂FGF1和FGF2激活FGFR，降低小鼠血脑屏障通透性，减轻脑水肿，改善神经行为功能评分，其保护性作用具有剂量正效应。FGF2治疗不影响胶原酶诱导小鼠脑出血模型出血量。 第二部分：FGFR抑制FGF2引起的FGFR激活对小鼠脑出血后脑损伤的影响 目的：研究FGFR抑制剂PD173074对FGFR激动剂FGF2在小鼠脑出血后脑保护作用的影响。 方法：使用胶原酶诱导小鼠右基底节脑出血模型，小鼠脑出血后30分钟随机接受左侧脑室微量注射FGF2100ng+PD1730740.1nmol、FGF2100ng+PD1730740.5nmol或FGF2100ng+25%DMSO/PBS治疗。PD173074溶解于25%DMSO PBS溶液中，FGF2100ng+25%DMSO/PBS治疗组为PD173074治疗对照组。脑出血后72小时，评测小鼠神经功能评分，检测脑水肿及脑组织对Evans Blue的通透性，western-blot方法检测FGFR磷酸化水平。 结果：FGF2100ng+25%DMSO/PBS治疗组与FGF2100ng治疗组比较，小鼠神经行为功能评分及脑水肿无显著差异（P＞0.05），脑组织Evans Blue透过率无显著差异（P＞0.05）。FGF2100ng+0.1nmol PD173074治疗组与FGF2100ng+25%DMSO/PBS治疗组比较，小鼠神经行为功能缺损和脑水肿呈加重趋势，但均无显著差异（P＞0.05）。FGF2100ng+0.5nmol PD173074治疗组与FGF2100ng+25%DMSO/PBS治疗组比较，FGFR磷酸化水平降低（P＜0.05），神经行为功能评分损害加重（P＜0.05），右基底节区脑水肿升高（P＜0.05），脑组织Evans Blue透过率显著升高（P＜0.05)。 结论： FGFR抑制剂抑制FGF2对FGFR的激活，逆转FGF2对小鼠脑出血后的损伤的保护作用。 第三部分：FGFR下游通路PI3K/Akt-Rac1介导的RhoA抑制对小鼠脑出血后脑损伤的影响 目的：研究 FGFR激活保护小鼠脑出血后损伤所依赖的下游通路PI3K/Akt及Rac1激活对RhoA及内皮细胞粘着连接的影响。 方法：第一节，使用胶原酶诱导小鼠右基底节脑出血模型，雄性CD-1小鼠随机分为假手术组、PBS对照组、FGF2100ng治疗组、FGF2100ng+25%DMSO/PBS治疗组、FGF2100ng+PD1730740.5nmol治疗组。收集脑出血后72小时脑组织，western-blot方法检测各组Akt磷酸化水平，Rac1、RhoA活性检测试剂盒检测各组Rac1、RhoA活性，免疫共沉淀方法检测粘着连接蛋白VE-cadherin-p120-catenin-β-catenin复合物水平。 第二节，PI3K抑制剂LY204002溶解于25%DMSO/PBS溶液中。使用胶原酶诱导小鼠右基底节脑出血模型，小鼠脑出血后30分钟随机接受左侧脑室微量注射 FGF2100ng+LY29400250nmol或 FGF2100ng+25%DMSO/PBS治疗。FGF2100ng+25%DMSO/PBS治疗组为LY294002治疗对照组。脑出血后72小时，进行小鼠神经功能评分，检测脑水肿及脑组织对Evans Blue的通透性，western-blot方法检测Akt磷酸化水平，Rac1、RhoA活性检测试剂盒检测各组Rac1、RhoA活性，免疫共沉淀方法检测粘着连接蛋白 VE-cadherin-p120-catenin-β-catenin复合物水平。 结果：第一节，对照组与假手术组比较，小鼠脑出血后72小时Rac1活性降低（P＜0.05），RhoA活性升高（P＜0.05），粘着连接蛋白复合物 VE-cadherin-p120-catenin-β-catenin水平降低（P＜0.05）。FGF2100ng治疗组与PBS对照组比较，小鼠脑出血后72小时pAkt水平升高（P＜0.05)，Rac1活性升高（P＜0.05)，RhoA活性降低（P＜0.05)，VE-cadherin-p120-catenin-β-catenin复合物水平升高（P＜0.05）。FGF2100ng+25%DMSO/PBS治疗组与FGF2100ng治疗组比较，pAkt、Rac1活性、RhoA活性及VE-cadherin-p120-catenin-β-catenin复合物水平无显著差异。 FGF2100ng+PD1730740.5nmol治疗组与 FGF2100ng+25%DMSO/PBS治疗组比较，小鼠脑出血后72小时pAkt水平降低（P＜0.05)，Rac1活性降低（P＜0.05)，RhoA活性升高（P＜0.05)，VE-cadherin-p120-catenin-β-catenin复合物水平降低（P＜0.05）。 第二节，FGF2100ng+LY29400250nmol治疗组与 FGF2100ng+25%DMSO/PBS治疗组比较，小鼠脑出血后72小时神经行为功能评分损害加重（P＜0.05），脑水肿增加（P＜0.05），Evans Blue脑组织透过率升高（P＜0.05），pAkt水平降低（P＜0.05），Rac1活性降低（P＜0.05），RhoA活性升高（P＜0.05），VE-cadherin-p120-catenin-β-catenin复合物水平降低（P＜0.05)。 结论：小鼠脑出血后pAkt水平无显著改变，RhoA活性升高，Rac1活性降低，粘着连接蛋白VE-cadherin-p120-catenin-β-catenin复合物水平降低，血脑屏障破坏增加。FGF2激活FGFR，导致下游PI3K激活，pAkt升高，Rac1活性升高，抑制RhoA降低RhoA活性及其介导的粘着连接蛋白复合物降解，减少血脑屏障破坏。PD173074抑制FGF2诱导的FGFR激活，导致下游PI3K抑制，pAkt降低，Rac1活性降低，RhoA活性升高，血脑屏障粘着连接蛋白复合物降解增加，逆转FGF2的保护作用。抑制FGFR下游关键环节PI3K，pAkt降低，Rac1活性降低，RhoA活性升高，血脑屏障粘着连接蛋白复合物降解增加，FGF2激活FGFR对脑出血后的保护作用亦被逆转。 第四部分：RhoA抑制对小鼠脑出血后脑损伤的影响 目的：研究抑制RhoA活性对小鼠脑出血后的保护作用。 方法：使用Rho-kinase抑制剂Y27632抑制小鼠RhoA活性，Y27632溶解于PBS溶液中。雄性CD-1小鼠被随机分为假手术组、PBS对照组和Y2763220nmol治疗组。使用胶原酶注射诱导小鼠右基底节脑出血模型，小鼠脑出血后30分钟接受左侧脑室微量注射Y2763220nmol或PBS治疗。脑出血后72小时，评测小鼠神经功能评分，检测脑组织含水量及脑组织对Evans Blue的通透性，RhoA活性检测试剂盒检测脑组织 RhoA活性，免疫共沉淀及 western-blot方法检测粘着连接蛋白VE-cadherin-p120-catenin-β-catenin复合物水平。 结果：Y2763220nmol治疗组与对照组比较，小鼠脑出血后72小时RhoA活性降低（P＜0.05），VE-cadherin-p120-catenin-β-catenin复合物水平升高（P＜0.05），脑组织对Evans Blue透过性降低（P＜0.05），病侧基底节区脑水肿降低（P＜0.05)，神经行为功能评分改善（P＜0.05)。 结论：抑制 RhoA活性可减少脑出血后粘着连接破坏，降血脑屏障通透性，减轻脑水肿，改善神经行为功能。