【摘 要】
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马流产沙门氏菌可引起妊娠母马流产,幼驹败血症,下痢,公马睾丸炎,髯甲脓肿。该病可给马养殖业造成严重经济损失。本研究首先对新疆地区养马较为集中的昭苏县、富蕴县、特克斯
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马流产沙门氏菌可引起妊娠母马流产,幼驹败血症,下痢,公马睾丸炎,髯甲脓肿。该病可给马养殖业造成严重经济损失。本研究首先对新疆地区养马较为集中的昭苏县、富蕴县、特克斯县、和静县、吉木乃县的养殖场(户)的2768份马血清样品进行马流产沙门氏菌血清学调查。间接ELISA法检测结果显示,这5县马养殖场(户)中马流产沙门氏菌病抗体平均阳性率为28.68%;雌性马匹的抗体阳性率(36.9%)略高于雄性马匹(29.7%),但差异不显著;吉木乃和和静县马匹抗体阳性率相对较低,为3.24%-9.78%,特克斯县和昭苏县抗体阳性率相对较高,为27.17%~43.91%;从年龄统计结果来看,各年龄段的的马匹均有一定的抗体阳性率。本研究从流产马匹的病料中分离纯化,并经生化和PCR鉴定得到马流产沙门氏菌新疆分离株。本研究进一步利用分离菌株的基因组,经PCR扩增得到了马流产沙门氏菌鞭毛蛋白基因FliC2,大小为1427 bp,并构建重组质粒pET28a-FliC2,在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中经IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE电泳分析该重组蛋白大小约为52KDa,Western-blotting分析显示该蛋白具有反应原性。将纯化后的融合蛋白F1iC2免疫小鼠,检测结果显示,免疫小鼠中产生了较高水平的抗体,抗体效价可达1:218 700,且以IgG1亚型为主。将纯化后的融合蛋白免疫马匹,免疫马血清中同样产生了较高水平的特异性抗体,抗体效价可达1:72 900。本研究进一步利用PCR扩增了截短的马流产沙门氏菌鞭毛蛋白基因FliCl,大小为840 bp,并构建重组质粒pGEX-FliC1。诱导表达的融合蛋白FliCl-GST经SDS-PAGE电泳分析大小为56 KDa。将纯化后的FliC1蛋白和本实验室已表达的gD蛋白联合免疫马匹,结果表明,两种蛋白联合免疫组马血清中抗体水平高于这两种蛋白单独免疫组,抗体效价可达1:218 700。检测结果还表明,FliC1蛋白可促进gD蛋白免疫水平的升高。且产生的抗体以亚型IgG1为主。对抗体持续期的检测表明抗体维持较高水平可达170 d。为比较FliC两个不同大小片段免疫效果的差异,本研究将FliC1和FliC2分别与SeM蛋白联合免疫C57BL/6小鼠,对免疫小鼠抗体的效价、抗体亚型以及攻毒保护力评估不同大小鞭毛蛋白对SeM蛋白免疫效果的影响。结果显示,FliC2与SeM联合免疫组产生的抗体效价更高,抗体主要以IgG1为主;对小鼠的攻毒保护率最高,可达80%。该结果表明,鞭毛蛋白FliC2对SeM辅助免疫效果比FliC1更好。该结果对我们更好地利用FliC蛋白进行相关研究奠定实验基础。
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