第一部分p53、COX2、EGFR和nm23在结直肠癌中的表达与结直肠癌患者PFS的关系背景:结直肠癌是常见的消化道恶性肿瘤,其发病率和死亡率逐年升高,目前仍缺乏能准确预测肠癌患者预后的指标。目的:检测p53、COX2、EGFR和nm23蛋白在肠癌组织中的表达,分析其表达对肠癌术后患者无进展生存期(progression free survival,PFS)的影响,评估其对肠癌术后患者预后的预测作用。方法:回顾性队列分析苏州大学附属第三医院2003年3月至2010年7月459例结直肠癌术后患者病理石蜡标本,采用免疫组织化学染色法检测p53、COX2、EGFR和nm23蛋白在肠癌组织中的表达,所有标本均由两名资深病理学医师阅片诊断,记录临床资料,Kaplan-Meier分析p53、COX2、EGFR和nm23蛋白表达及其他临床参数对患者PFS的影响,Cox回归模型分析影响肿瘤进展风险的因素。结果:免疫组织化学染色结果显示,p53表达阳性的患者占58.52%,COX2表达阳性的患者占84.10%,EGFR表达阳性的患者占53.59%,nm23表达阳性的患者占67.25%。统计分析结果显示,EGFR和nm23表达、TNM分期、病理分级影响结直肠癌手术后患者的PFS,差异有统计学意义(P<0.05)。EGFR表达为结直肠癌术后患者预后的负性预测因子,其高表达的患者中位PFS为21.7月,低表达的患者中位PFS为57.8月(χ2=20.88,P=0.001);而nm23表达为直肠癌术后患者预后的正性预测因子,其高表达的患者中位PFS为37.7月,低表达的患者中位PFS为21.4月(χ2=7.364,P=0.007)。Cox分析表明,与TNM分期I-II期的患者比较,TNM分期III-IV期的肠癌患者肿瘤进展的风险更高(HR=1.604,95%CI:1.108-2.321,P=0.012),TNM分期是独立的预后预测因子;与病理分级I-II级的患者比较,病理分级III-IV的患者肿瘤进展的风险更高(HR=1.521,95%CI:1.068-2.167,P=0.02);与EGFR低表达的患者比较,EGFR高表达的患者肿瘤进展的风险更高(HR=1.667,95%CI:1.177-2.362,P=0.004);与nm23高表达的患者比较,nm23低表达的患者肿瘤进展的风险更高(HR=0.412,95%CI:0.288-0.591,P<0.001);与EGFR低表达且nm23高表达的患者比较,EGFR高表达且nm23低表达的患者肿瘤进展的风险更高(HR=0.245,95%CI:0.142-0.426,P<0.001)。结论:p53和COX2的表达与肠癌患者的无进展生存期无关,其可能只与肿瘤的发生有关;EGFR表达为结直肠癌术后患者复发风险的预测因子,EGFR高表达的结直肠癌术后患者肿瘤进展的风险更高;nm23表达为结直肠癌术后患者预后的正性预测因子,nm23低表达的结直肠癌术后患者肿瘤进展的风险更高;EGFR和nm23可作为一对更为有效的评估肠癌患者预后的组合性预测因子,检测其表达状态对评估肠癌进展风险有重要意义。第二部分亚组分析p53、COX2、EGFR和nm23表达对不同TNM分期及不同病理分级的结直肠癌患者PFS影响的差异背景:TNM分期和病理分级是评估肿瘤进展风险的指标,其与一些肿瘤标志物联合分析可进一步提高预后判断的准确性。目前,p53、COX2、EGFR和nm23的表达对不同TNM分期及不同病理分级的结直肠癌术后患者预后的影响是否存在差异仍需进一步研究。目的:亚组分析p53、COX2、EGFR和nm23表达与不同TNM分期及不同病理分级的结直肠癌术后患者PFS的关系。明确其表达对不同TNM分期及不同病理分级肠癌患者PFS影响的差异,确定最佳的预测群体,进一步提高预后判断的准确性。方法:通过检测p53、COX2、EGFR和nm23的表达,亚组分析459例结直肠癌组织中p53、COX2、EGFR和nm23表达对不同TNM分期及不同病理分级患者PFS影响的差异。结果:亚组分析结果表明,EGFR表达主要影响TNM分期I-II期患者的PFS,TNM分期I-II期EGFR高表达的结直肠癌患者中位PFS为33.5月,EGFR低表达TNM分期I-II期的结直肠癌患者中位PFS为70.4月(χ2=9.53,P=0.002);EGFR高表达TNM分期III-IV期的结直肠癌患者中位PFS为19.2月,EGFR低表达TNM分期III-IV的结直肠癌患者中位PFS为37.9月(χ2=7.97,P=0.005)。在不同病理分级的患者中,EGFR高表达病理分级I-II级的结直肠癌患者中位PFS为28.4月,EGFR低表达病理分级I-II级的结直肠癌患者中位PFS为65.1月(χ2=18.766,P<0.001);EGFR高表达病理分级III-IV级的结直肠癌患者中位PFS为19.6月,EGFR低表达病理分级III-IV级的结直肠癌患者中位PFS为30.7月(χ2=3.846,P=0.05)。nm23表达则主要影响TNM分期III-IV期患者的PFS,nm23高表达TNM分期I-II级的结直肠癌患者中位PFS为47.3月,而nm23低表达TNM I-II期的结直肠癌患者中位PFS为48.9月(χ2=0.101,P=0.75);nm23高表达TNM分期III-IV期的结直肠癌患者中位PFS为28.8月,nm23低表达TNM分期III-IV期的结直肠癌患者中位PFS为14.7月(χ2=3.846,P=0.05)。在不同病理分级的患者中,nm23表达主要影响病理分级III-IV级患者的PFS,nm23高表达病理分级I-II级的结直肠癌患者中位PFS为40.4月,nm23低表达病理分级I-II级的结直肠癌患者中位PFS为35.9月(χ2=1.102,P=0.294);nm23高表达病理分级III-IV级的结直肠癌患者中位PFS为28.5月,nm23低表达病理分级III-IV级的结直肠癌患者中位PFS为15.9月(χ2=7.699,P=0.006)。结论:EGFR和nm23的表达对不同TNM分期及不同病理分级肠癌患者预后的影响存在差异,EGFR主要影响结直肠癌术后TNM分期I-II期及病理分级I-II级患者的PFS,其主要为TNM I-II期结直肠癌术后患者预后的重要预测因子,也是病理分级I-II级结直肠癌术后患者预后的预测因子。nm23主要影响结直肠癌术后TNM分期III-IV期及病理分级III-IV级患者的PFS,nm23是结直肠癌术后TNM分期III-IV期患者预后的预测因子,也是病理分级III-IV级结直肠癌术后患者预后的重要预测因子。第三部分亚组分析EGFR和nm23表达对直肠癌患者手术及化疗疗效的影响背景:手术及化疗是直肠癌治疗的重要手段,但术后复发、转移仍是造成患者死亡的重要原因,如何提高手术及化疗的疗效是当前所面临的重要难题。目前,对一些肿瘤标志物的检测及分析既可提高对肿瘤患者预后评估的准确性,也有利于肿瘤治疗精准化的发展。目的:亚组分析EGFR和nm23的表达对不同手术方式及不同化疗方案治疗的直肠癌患者PFS的影响,探讨其对手术及化疗疗效的影响及临床指导意义。方法:去除459例结直肠癌患者中216例结肠癌术后患者病例资料,回顾性队列研究243例直肠癌术后患者临床及病理资料。运用Kaplan-Meier、Cox回归及亚组分析直肠癌组织中EGFR和nm23蛋白的表达与直肠癌术后患者无进展生存期(progression free survival,PFS)之间的关系及对手术和化疗疗效的影响。结果:免疫组织化学染色结果显示,在直肠癌病理标本中,EGFR表达的患者占51.85%(151/243),nm23表达的患者占66.26%(161/243)。Kaplan-Meier分析显示,EGFR高表达的直肠癌术后患者预后较差,中位PFS为21.0月,低表达患者的预后较好,中位生存期为37.8月(χ2=8.687,P=0.003);而nm23高表达的直肠癌术后患者预后较好,中位PFS为35.4月,低表达患者预后较差,中位PFS为13.4月(χ2=15.593,P=0.001)。EGFR低表达且nm23高表达的患者PFS更长,中位PFS为62.9月(χ2=18.227,P<0.001)。Cox回归分析显示,相较于Dixon术式治疗的患者,Hartman或Miles术式治疗的患者肿瘤进展的风险较高,单因素分析结果(HR=1.747,95%CI:1.270-2.405,P=0.001),多因素分析结果(HR=1.773,95%CI:1.286-2.446,P<0.001);与FOLFOX4方案化疗的患者比较,非FOLFOX4方案化疗的患者肿瘤进展的风险更高,单因素分析结果(HR=1.690,95%CI:1.226-2.329,P=0.001)和多因素分析结果(HR=1.710,95%CI:1.239-2.360,P=0.001);相较于EGFR低表达且nm23高表达的直肠癌术后患者,EGFR高表达且nm23低表达患者肿瘤进展的风险更高(HR=2.290,95%CI:1.548-3.387,P<0.001),多因素分析显示,EGFR和nm23可作为直肠癌术后患者预后的联合预测因子(HR=1.966,95%CI:1.319-2.929,P=0.001)。此外,分层分析也表明,EGFR低表达且nm23高表达Dixon术式治疗的患者较其他患者预后更好,中位PFS为62.9月(χ2=9.170,P=0.003),且在此类患者中,接受FOLFOX4方案化疗的患者较非FOLFOX4方案化疗的患者预后更好,FOLFOX4方案化疗的患者中位PFS为61.1月,非FOLFOX4方案化疗的患者中位PFS为36.3月(χ2=8.218,P=0.004)。结论:EGFR和nm23表达对直肠癌术后患者的预后有重要影响,EGFR和nm23是一对理想的组合性预测因子;与Dixon术式治疗的直肠癌患者比较,Hartman或Miles术式治疗的患者肿瘤进展的风险更高;与FOLFOX4化疗方案化疗的患者比较,非FOLFOX4方案化疗的患者肿瘤进展的风险更高;在Dixon术式治疗后接受FOLFOX4方案化疗的患者中,EGFR低表达且nm23高表达的患者预后更好。综上,Dixon术后给予FOLFOX4方案化疗的患者预后较好,且EGFR和nm23的表达可影响其疗效。第四部分TCGA数据验证EGFR、nm23表达对结直肠癌患者生存期的影响背景:TCGA数据库是由美国政府发起并建立的肿瘤基因图谱数据库,目的是为了通过基因组分析技术,采用大规模的基因组测序,绘制出人类所有肿瘤的基因组变异图谱,并进行系统分析,找到所有致癌和抑癌基因的微小变异,在基因水平了解癌细胞发生、发展的机制,在此基础上获得新的诊断、治疗及预后判断的方法,最后制定出肿瘤预防及治疗的新策略。目的:TCGA数据库是全球最有影响且最具权威的肿瘤基因数据库,因此,我们对TCGA数据库中结直肠癌表达EGFR和nm23的数据进行分析,通过其结果对本研究结果进行验证。方法:收集TCGA数据库中367例结直肠癌患者病例资料,整理EGFR和nm23表达的数据。其中男性191例,女性176例,年龄跨度为31~90岁,中位年龄65岁。运用Kaplan-Meier、Cox回归及亚组分析直肠癌组织中EGFR和nm23的表达对生存期的影响。结果:结果表明,结直肠癌患者的预后与直肠癌患者的TNM分期及EGFR和nm23的表达有关,总生存期(overallsurvival,OS)与TNM分期之间的相关性有统计学意义,TNM分期I-II期的患者中位OS为488天,TNM分期III-IV期的患者中位OS为409天(χ2=6.699,P=0.01)。EGFR高表达的结直肠癌患者预后较差,中位OS为409天,低表达患者的预后较好,中位OS为488天(χ2=6.602,P=0.01);而nm23高表达的结直肠癌患者预后较好,中位OS为525天,低表达患者预后较差,中位生存期为399天(χ2=7.631,P=0.006);EGFR低表达且nm23高表达的患者OS更长,中位生存期为580天(χ2=11.356,P=0.001)。单因素分析结果显示,相较于TNM分期为I-II期的患者,TNM分期为III-IV期的患者肿瘤进展的风险更高(HR=1.317,95%CI:1.068-1.623,P=0.005),多因素分析显示,TNM分期是影响OS的独立预后因子(HR=1.292,95%CI:1.047-1.595,P=0.017)。EGFR高表达的患者比EGFR低表达的患者肿瘤进展的风险更高,单因素分析结果(HR=1.315,95%CI:1.066-1.622,P=0.011)和多因素分析结果(HR=1.242,95%CI:1.000-1.543,P=0.016);与nm23高表达的患者比较,nm23低表达的患者肿瘤进展的风险更高,单因素分析结果(HR=0.744,95%CI:0.603-0.919,P=0.006),多因素分析(HR=0.802,95%CI:0.644-0.998,P=0.048)。与EGFR高表达且nm23低表达的患者比较,EGFR低表达且nm23高表达的患者预后更好,单因素分析结果(HR=1.595,95%CI:1.212-2.099,P=0.001),多因素分析显示,EGFR和nm23可作结直肠癌患者的组合性独立预测因子(HR=1.572,95%CI:1.194-2.070,P=0.001)。亚组分析结果表明,EGFR表达对TNM分期I-II期及III-IV期患者的OS均有影响,其中EGFR高表达TNM分期I-II期的结直肠癌患者中位OS为464天,EGFR低表达TNM分期为I-II期的结直肠癌患者中位OS为525天(χ2=3.264,P=0.05);EGFR高表达TNM分期III-IV期的结直肠癌患者中位OS为362天,EGFR低表达的TNM分期为III-IV期的结直肠癌患者中位OS为476天(χ2=4.074,P=0.044);nm23表达对TNM分期I-II期患者的OS无影响,而主要影响TNM分期III-IV期患者的OS,nm23高表达TNM分期为I-II期的结直肠癌患者中位OS为580天,nm23低表达TNM分期为I-II期的结直肠癌患者中位OS为412天(χ2=2.570,P=0.109);nm23高表达TNM分期III-IV期的结直肠癌患者中位OS为479天,nm23低表达TNM分期III-IV期的结直肠癌患者中位OS为380天(χ2=3.941,P=0.047);EGFR低表达且nm23高表达TNM分期为I-II期的结直肠癌患者中位OS为588天(χ2=5.926,P=0.015);EGFR低表达且nm23高表达TNM分期为III-IV期的结直肠癌患者中位OS为555天(χ2=4.395,P=0.036)。结论:TCGA数据统计结果与本研究数据统计结果基本一致,EGFR和nm23表达对结直肠癌患者的生存期有重要影响,EGFR和nm23是一对理想的组合性预测因子,并且对不同TNM分期的结直肠癌患者预后的影响存在差异,其可用于结直肠癌预后判断及指导治疗。