内质网应激对快速起搏心房ANP分泌的影响

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[目的]心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)是参与血压、体液调节的肽类激素,主要由心房合成和释放。心房颤动时,血浆ANP浓度增高,且ANP浓度变化与房颤的病程有关。房颤时存在内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS),但是ERS对房颤ANP分泌异常调控机理尚不清楚。本研究以快速心房起搏家兔为研究对象,探讨ERS对房颤心房ANP分泌的调节作用,从而阐明房颤时心脏内分泌特性改变的病理生理学机制,为临床防治心房颤动提供实验依据。  [方法]选2.5±0.5kg新西兰大耳白兔,采用快速心房起搏家兔在体模型和离体跳动心房灌流模型进行实验。(1)快速心房起搏家兔在体模型实验:分对照组、刺激组。采用 BL-420生理机能实验系统,经右颈外静脉插管刺激兔心房,同时记录心电图;HE染色法观察快速起搏2h心房肌形态学变化,且利用透射电镜观察,快速起搏2h后心房肌内质网超微结构变化;利用 western blot法检测 ERS标志蛋白 GRP78的表达,利用放射免疫分析法检测血中 ANP浓度,初步探讨快速心房起搏引起 ERS与 ANP分泌之间的关系。(2)离体跳动灌注心房模型:分离正常家兔左心房,用 HEPES缓冲液灌注心房60 min,稳定后,开始每2 min收集一管灌流液,共36管。前24管为对照组,后12管为衣霉素诱导 ERS组,收集样品的同时记录每搏量及心房内压。利用放射免疫分析法测灌流液中 ANP量。  [结果]1.利用颈外静脉插管诱导快速心房起搏,成功模拟了心房颤动的发生;2.苏木素-伊红染色结果,心房肌纤维示有分支、长带状,连接成网状,并可见明暗相间的横纹。细胞核现卵圆形,居心房肌纤维中央,与假手术组相比,起搏2h组心肌无明显的变化;透射电镜观察结果:起搏2h心房肌肌浆网扩张,大量空泡形成,糖原颗粒聚集明显,肌丝溶解;3.用 Western blot测心房组织GRP78变化结果:起搏2h组心房组织 GRP78表达较对照组明显增加;放射免疫分析法测定血中 ANP浓度,结果对照组:0.958±0.122μg/L,起搏2h组:2.011±0.186μg/L;4.衣霉素明显增加离体跳动灌流心房 ANP分泌,但是心房搏出量和内压与对照组相比无显著性差异。  [结论]内质网应激对心房ANP分泌起调节作用,而快速心房起搏引起心肌ERS,进而参与房颤心房ANP分泌增多。
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