【摘 要】
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香菇β-葡聚糖是临床上常用的抗癌辅助药。本课题采用高碘酸氧化、Smith降解、气相色谱、高效液相色谱、红外光谱、热重分析、刚果红反应实验等方法,对香菇的不同部位分离纯化的β-葡聚糖进行结构分析,结果得到:胞内中性糖糖苷键组成为1-4键为78.84%,1-6键14.98%,1-3键6.17%;胞壁中性糖糖苷键组成为1-4键为42.40%,1-6键48.51%,1-3键9.95%;胞内酸性糖糖苷键组分
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香菇β-葡聚糖是临床上常用的抗癌辅助药。本课题采用高碘酸氧化、Smith降解、气相色谱、高效液相色谱、红外光谱、热重分析、刚果红反应实验等方法,对香菇的不同部位分离纯化的β-葡聚糖进行结构分析,结果得到:胞内中性糖糖苷键组成为1-4键为78.84%,1-6键14.98%,1-3键6.17%;胞壁中性糖糖苷键组成为1-4键为42.40%,1-6键48.51%,1-3键9.95%;胞内酸性糖糖苷键组分为1-6键65.69%,1-3键34.31%;胞壁酸性糖糖苷键组分为1-6键78.40%,1-3键21.60%。胞内酸性糖的相对分子量为527881.9 Da、胞壁酸性糖的相对分子量为562847.4 Da,红外光谱扫描在854.36 cm-1处均有葡萄糖β端基差相异构C-H变角振动吸收峰,即为β-糖苷键构型葡聚糖。热重分析香菇胞壁中性糖与胞壁酸性糖热分解温度分别为310.8℃,292.9℃,存在一定的差异,也进一步验证了中性糖与酸性糖是不同的物质。采用MTS法检测香菇β-葡聚糖样品（Lewp02）的细胞毒性,结果得到:香菇β-葡聚糖（Lewp02）具有直接抑制Hepa1-6细胞增殖作用,并具有促Hepa1-6凋亡效果;高浓度的Lewp02能使Hepa1-6阻滞于G0/G1,S、G2/M比例减低,具有明显抑制鼠肝癌细胞Hepa1-6细胞分裂增殖效果;Lewp02能促Raw264.7高表达TNF-α,从而增强对Hepa1-6增殖抑制。但Lewp02对正常细胞L929无细胞毒性,也不影响其细胞周期。结果提示Lewp02作为抗癌辅助药具有安全性。采用半定量PCR检测细胞β-葡聚糖受体基因转录水平,结果得到:Hepa1-6和Raw264.7细胞所具有的β-葡聚糖受体基因表达差异明显,其中Hepa1-6不表达Dectin-1,TLR2、TLR6、CD36和CR3表达水平低下,但TLR4转录高表达;在巨噬细胞Raw264.7上,CD36、CR3、Dectin-1、TLR2、TLR4、TLR6均高表达。利用流式细胞仪检测可得到:Lewp02-FITC均能被“内吞”进入Hepa1-6和Raw264.7细胞内,但相比Hepa1-6细胞,Lewp02-FITC能更快被“内吞”进入Raw264.7细胞内,在实验设计的1h、2h、4h时间点,胞吞细胞占比分别为81.56%、91.58%、98.6%,这与Raw264.7细胞表面具有多种受体基因的转录表达有密切关系。激光共聚焦检测结果可知:进入细胞的Lewp02-FITC分布于细胞膜和细胞质,细胞核没有分布,该结果为后续研究Lewp02直接影响肿瘤细胞的增殖与分化提供了重要的参考信息。在Raw264.7与Hepa1-6共培养体系下,能有效激活Raw264.7产生IL-6、TNF-α细胞。TNF-α最多可提高到57倍左右。产生的细胞因子能有效地促进癌细胞凋亡。
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