Caveolin-1基因敲除小鼠下颌第一磨牙牙齿的表型分析

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牙齿发育是一个长期而复杂的生物学过程,包括上皮与间充质之间的相互接触相互诱导,细胞增殖分化,牙齿形态发生,牙体硬组织矿化和牙萌出等,这一过程不仅发生在胚胎期,而且持续到出生后。在此过程中,多种信号分子通过级联反应所构成的信号网络贯穿于牙齿发育的始末。  窖蛋白-1(Caveolin-1)是胞膜窖(Caveolae)的标志性蛋白,能够募集多种信号分子至Caveolae,并调节它们的活性。  本课题组的前期研究发现,在不同发育阶段的小鼠下颌第一磨牙牙胚中均有Caveolin-1、细胞外基质金属蛋白酶诱导物(CD147)及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达;在体外培养的成釉细胞中,封闭Caveolin-1基因的表达,可使MMP-2在转录水平和蛋白水平的表达降低,高糖型CD147表达降低,提示Caveolin-1可能通过调节CD147的糖基化水平,进而影响MMP-2的表达。其他学者的研究也表明Caveolin-1参与牙胚发育及成釉细胞的生物学活动。但是,当Caveolin-1的基因表达异常时,是否会对牙齿发育造成组织形态学或宏观结构上可见的异常改变尚不清楚。  目的:  对Caveolin-1基因敲除小鼠(Knockout,KO)下颌第一磨牙进行牙胚组织形态学及牙齿表型观察,为深入研究Caveolin-1在牙齿发育中的作用提供组织学基础。  方法:  1.选取胎龄为E13.5、E14.5、E16.5、E18.5天和出生后3日龄、2周龄、1月龄Caveolin-1基因敲除小鼠及同源野生型(Wildtype,WT)小鼠下颌第一磨牙牙胚/牙齿,经HE染色,光学显微镜下观察组织学形态。  2.选取1月龄Caveolin-1基因敲除小鼠及同源野生型小鼠下颌第一磨牙,采用显微CT观察牙体硬组织形态与结构。  结果:  1.HE染色结果显示:与同时期WT鼠相比,E13.5天,KO鼠及WT鼠牙胚均处于蕾状期,两者未见明显异常。E14.5天,WT鼠牙胚进入帽状期,可见成釉器分化为内釉上皮、外釉上皮和星网状层,釉结结构明显。KO鼠牙胚仍处于蕾状期,成釉器未见明显分层及原发性釉结形成。E16.5天,KO鼠成釉器细胞可见分层为内釉上皮层、星网状层、中间层和外釉上皮层,但成釉器体积较小,颈环处上皮芽向下方间充质中深入较浅。E18.5天,KO鼠成釉器进入钟状期,此时磨牙形态已经确定,成釉器细胞分层明显,但内釉上皮层细胞柱状形态不明显。3日龄,KO鼠成釉器的内釉上皮亦分化为成釉细胞,呈高柱状,但细胞核极化方向不明显。2周龄,KO鼠成釉细胞呈颗粒状,细胞排列紊乱。3日龄、2周龄、1月龄KO鼠成牙本质细胞呈颗粒状,缺乏高柱状形态和典型的细胞突起,细胞核极化方向不明显。  2.Micro-CT及三维重建结果显示:与WT鼠牙冠部相比较,KO鼠牙尖锐利,釉质厚度较薄,甚至缺如,根管较粗大,根尖孔敞开。  结论:  1.Caveolin-1基因表达缺失可导致小鼠磨牙牙胚发育的蕾状期-帽状期过渡出现暂时性滞后。  2.Caveolin-1基因表达缺失影响成釉细胞和成牙本质细胞的形态及细胞极化。  3.Caveolin-1基因表达缺失可引起牙釉质发育缺陷和根尖孔闭合受阻。
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