顺铂对小鼠耳蜗TRPA1和TRPV1表达的影响

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目的研究顺铂对小鼠耳蜗瞬时受体电位通道蛋白A1(transient receptor potentialA1,TRPA1)和瞬时受体电位通道蛋白V1(transient receptor potential vanilloid1,TRPV1)表达的影响,探讨TRPA1和TRPV1在顺铂耳毒性中的可能作用,为临床防治顺铂耳毒性聋提供新的方法和理论依据。方法70只健康成年BALB/c小鼠随机分成对照组、顺铂2.5mg/kg组、顺铂3.5mg/kg组、顺铂4.5mg/kg组和顺铂5.5mg/kg组,每组14只,腹腔连续注射5d,每天1次。应用免疫荧光染色方法、显微图像分析和蛋白质印迹技术检测TRPA1和TRPV1在小鼠耳蜗中的表达;同时结合听脑干反应(auditorybrainstem response,ABR)测试,测定用药前后小鼠听力的变化。结果1.腹腔连续注射5d后,在各刺激频率下,不同浓度顺铂组小鼠ABR阈移均明显增大,与对照组比较均差异显著(P<0.01);并且随着顺铂浓度的增加,ABR阈移亦显著增大,呈现明显的量效关系(P<0.01)。2.免疫荧光染色及显微图像分析结果显示,对照组小鼠耳蜗外毛细胞、螺旋神经节以及血管纹中均有TRPA1和TRPV1的微弱表达;不同浓度顺铂组小鼠耳蜗上述各部位中TRPA1和TRPV1的表达均较对照组明显增强(P<0.05,P<0.01),但顺铂组间TRPA1的表达无明显差异,而TRPV1的表达则随顺铂浓度的增大而明显增强(P<0.05,P<0.01)。3.蛋白质印迹检测及半定量分析结果显示,对照组小鼠耳蜗中TRPA1与TRPV1的蛋白表达水平较低;不同浓度顺铂组TRPA1和TRPV1的蛋白表达水平均较对照组明显增高(P<0.05,P<0.01),但顺铂组间TRPA1的蛋白表达水平无明显差别,而TRPV1的蛋白表达水平则随顺铂浓度的增大而明显增强(P<0.05,P<0.01)。结论正常BALB/c小鼠耳蜗中仅有TRPA1和TRPV1的少量表达。顺铂可增强TRPA1和TRPV1在小鼠耳蜗中的表达,并且随着顺铂浓度的增大,TRPV1的表达亦逐渐增强,提示TRPA1和TRPV1介导了顺铂的耳毒性损伤,并且TRPV1在顺铂耳毒性损伤中可能起主导作用。
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