论文部分内容阅读
松果菊苷(Echinacoside,ECH)是一种苯乙醇苷类化合物,为松果菊的主要有效成分之一,管花肉苁蓉、玄参科植物兔耳草等中草药中也可分离得到,肉苁蓉中ECH含量最高,性状为白色结晶粉末。松果菊苷被证明具有多种药理活性,松果菊苷对帕金森氏病和阿尔茨海默氏病有效,有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、保护肝脏、抗糖尿病作用、睾丸和精子损伤保护作用以及免疫调节等,且毒性作用较弱。目前关于松果菊苷对CYP450酶活性影响尚未见报道,同时大鼠和人存在种属差异性,因此,在本实验中,采用肝微粒体在体外孵育,结合鸡尾酒法评价松果菊苷对大鼠和人肝微粒体细胞色素P450酶的活性影响,同时采用高效液相色谱(HPLC)检测技术,来预测其在联合用药时潜在的代谢性相互作用,为临床合理用药提供参考。具体的实验结果如下:
1.通过对5种探针底物进行全波长扫描发现各探针底物的最大紫外吸收波长分别为甲苯磺丁脲274nm、睾酮250nm、奥美拉唑305nm、氯唑沙宗282nm、非那西丁249nm,各探针底物的最大紫外吸收波长都在270nm附近,最终将270nm定为紫外检测波长。
2.采用高效液相色谱法(HPLC)同时测定肝微粒体中5种主要特异性探针药物浓度。在常温下48h和-20℃下冷冻7天的稳定性良好,加样回收率均大于85%,各探针药物日内、日间精密度均<10%,达到检测要求;最低定量下限实验测得相对偏差均小于10%,达到检测要求。结果在上述条件下样品均稳定,此分析方法简单、快速、准确,可用于肝微粒体中非那西丁、奥美拉唑、氯唑沙宗、睾酮和甲苯磺丁脲的测定。
3.通过体外抑制实验,得到松果菊苷对大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP2E1、CYP2C19、CYP2C9和CYP3A4的IC50值分别为5.193、4.641、23.74、5.459和8.329μmol/L;松果菊苷对混合人肝微粒体CYP1A2、CYP2E1、CYP2C19、CYP2C9和CYP3A4的IC50值分别为21.84、19.47、8.378、21.10和57.19μmol/L。表明松果菊苷对大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP2E1、CYP3A4和CYP2C9酶活性有中等抑制作用,对CYP2C19酶活性有弱抑制作用。松果菊苷对人肝微粒体CYP2C19酶活性有中等抑制作用,对CYP2E1、CYP1A2和CYP3A4酶活性有弱抑制作用,但对CYP2C9酶活性既没有抑制作用也没有诱导作用。
结论:
1.本研究所建立的大鼠肝微粒体探针药物法具有操作简单、精密度高、准确度高。能够同时快速评价药物在体外对大鼠肝微粒体种主要亚型CYP1A2、CYP2E1、CYP2C19、CYP2C9和CYP3A4活性的影响。
2.松果菊苷对大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP2E1、CYP2C19、CYP2C9和CYP3A4的IC50值范围为4.426~23.72μmol/L,而对人肝微粒体CYP1A2、CYP2E1、CYP2C19、CYP2C9和CYP3A4的IC50值范围为8.378~57.19μmol/L。表明松果菊苷对大鼠和人肝微粒体5种亚型酶均存在较弱的抑制作用。同时大鼠和人之间存在种属差异。
1.通过对5种探针底物进行全波长扫描发现各探针底物的最大紫外吸收波长分别为甲苯磺丁脲274nm、睾酮250nm、奥美拉唑305nm、氯唑沙宗282nm、非那西丁249nm,各探针底物的最大紫外吸收波长都在270nm附近,最终将270nm定为紫外检测波长。
2.采用高效液相色谱法(HPLC)同时测定肝微粒体中5种主要特异性探针药物浓度。在常温下48h和-20℃下冷冻7天的稳定性良好,加样回收率均大于85%,各探针药物日内、日间精密度均<10%,达到检测要求;最低定量下限实验测得相对偏差均小于10%,达到检测要求。结果在上述条件下样品均稳定,此分析方法简单、快速、准确,可用于肝微粒体中非那西丁、奥美拉唑、氯唑沙宗、睾酮和甲苯磺丁脲的测定。
3.通过体外抑制实验,得到松果菊苷对大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP2E1、CYP2C19、CYP2C9和CYP3A4的IC50值分别为5.193、4.641、23.74、5.459和8.329μmol/L;松果菊苷对混合人肝微粒体CYP1A2、CYP2E1、CYP2C19、CYP2C9和CYP3A4的IC50值分别为21.84、19.47、8.378、21.10和57.19μmol/L。表明松果菊苷对大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP2E1、CYP3A4和CYP2C9酶活性有中等抑制作用,对CYP2C19酶活性有弱抑制作用。松果菊苷对人肝微粒体CYP2C19酶活性有中等抑制作用,对CYP2E1、CYP1A2和CYP3A4酶活性有弱抑制作用,但对CYP2C9酶活性既没有抑制作用也没有诱导作用。
结论:
1.本研究所建立的大鼠肝微粒体探针药物法具有操作简单、精密度高、准确度高。能够同时快速评价药物在体外对大鼠肝微粒体种主要亚型CYP1A2、CYP2E1、CYP2C19、CYP2C9和CYP3A4活性的影响。
2.松果菊苷对大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP2E1、CYP2C19、CYP2C9和CYP3A4的IC50值范围为4.426~23.72μmol/L,而对人肝微粒体CYP1A2、CYP2E1、CYP2C19、CYP2C9和CYP3A4的IC50值范围为8.378~57.19μmol/L。表明松果菊苷对大鼠和人肝微粒体5种亚型酶均存在较弱的抑制作用。同时大鼠和人之间存在种属差异。