论文部分内容阅读
七鳃鳗隶属于圆口纲，是一类因营半寄生生活而引发机体显著特化的动物。由于其一般结构甚为原始，在脊椎动物进化史上代表着动物已进入有头、有雏形脊椎骨，但还无上、下颌这一发展水平，故在进化史上占有特殊地位，是现存的一类最原始的无颌类脊椎动物。通过对这类动物的研究，可使人们对于生活在5亿年前的古老脊椎动物有更进一步的了解。长期以来人们对于七鳃鳗的研究多集中于形态学方面，而对于其基因组学乃至蛋白质组学方面的研究却是空白。 选择日本七鳃鳗口腔腺为材料，以Gubler和Hoffanan的cDNA文库构建方法为基础，用带有Not Ⅰ酶切位点的Oligo dT（18） Linker Primer为反转录引物，于cDNA片段两端添加EcoR Ⅰ连接位点，酶切后克隆于带有Not Ⅰ／EcoR Ⅰ酶切位点的pBluescriptⅡSK（+）载体上构建了库容量为2.1x106pfu／mL且插入片段平均大小为1.2 kb的符合文库构建标准的日本七鳃鳗口腔腺cDNA文库。在cDNA第一链合成时，使用了RAV-2和SuperScriptⅡ两种逆转录酶确保了cDNA第一链合成的质量（包括数量和长度）。在连接、克隆cDNA的片段时，首先进行了cDNA片段长度筛选，基本上除去了400bp以下的cDNA短片段，借此提高全长cDNA的插入效率。 随机挑选文库中的克隆子进行序列测定，去除序列中载体部分后经生物信息学初步分析，共获得测序长度大于100bp且层析图谱较好的1323条EST序列。利用BlastX及BlastN软件在NCBI上的非冗余序列数据库中进行同源性对比分析，共有653条（49.36％）EST可于蛋白质或核苷酸水平上找到同源序列，其中328条与七鳃鳗科物种同源。同源