论文部分内容阅读
目的 食管癌是人类常见的恶性肿瘤之一，占所有恶性肿瘤的2％，每年全球约有40万人死于食管癌。我国是食管癌高发地区之一。癌基因和抑癌基因表达的失调造成细胞内信号通路的改变，继而带来癌细胞的发生和发展。p53是人体内重要的抑癌基因，akt是人体内重要的癌基因。在正常人体细胞内两者处于动态平衡中，共同调节了细胞的增殖和凋亡。癌细胞凋亡和增殖的失衡提示其细胞内P53和Akt的表达较正常人体细胞发生了变化。本文旨在探究食管癌细胞中两个细胞内信号通路上游节点:P53和Akt蛋白之间的关系正常细胞发生了何种变化，初步明确其在癌细胞内的生物学特性，从而更好地了解肿瘤细胞的发生发展。 方法 取手术切除的食管癌及癌旁组织制成病理切片并行免疫组化检查，检测有无p-Akt1，p-Akt2，Akt和P53蛋白表达;取TE-1食管高分化鳞癌细胞培养，提取细胞蛋白western blot法检测其p-Akt1，p-Akt2，Akt和P53浓度;再分别使用P53抑制剂Pifithrin-α，Akt1抑制剂A-674563，Akt2抑制剂CCT128930作用于TE-1细胞，分别提取细胞蛋白，westernblot法检测p-Akt1，p-Akt2和P53浓度，观察蛋白之间相互关系;取人体食管癌组织对p53基因外显子进行基因测序，并比对GENEBANK发现其突变，对比相关文献明确突变类型; 结果 50例食管癌组织中，分别52％(26/50)、42％(21/50)、30％(15/50)、66％(33/50)的食管癌组织表达P53、Akt、p-Akt1和p-Akt2蛋白，癌旁组织分别22％(11/50)、18％(9/50)、8％(4/50)、28％(14/50)的癌旁组织表达P53、Akt、p-Akt1和p-Akt2蛋白，食管癌显著表达更多的P53(p=0.002)、Akt(p=0.009)、p-Akt1(p=0.005)和p-Akt2(p=0.000)蛋白。跟中高分化食管癌、Ⅲ+Ⅳ期食管癌、存在淋巴结转移的食管癌相比，P53蛋白在低分化食管癌、Ⅰ+Ⅱ期食管癌、没有淋巴结转移的食管癌中表达没有显著增加(p＞0.05)。跟中高分化食管癌、Ⅲ+Ⅳ期食管癌相比，Akt，p-Akt1,p-Akt2蛋白在低分化食管癌、Ⅰ+Ⅱ期食管癌中表达没有显著增加(p＞0.05);在有淋巴结转移的食管癌中Akt，p-Akt1，p-Akt2蛋白表达显著增加(p＜0.05，提示Akt蛋白的两个亚型参与了食管癌细胞再淋巴结内的转移。和对照组相比，使用P53抑制剂Pifithrin-α的食管癌TE-1细胞P53、Akt、p-Akt1表达量明显下降(p=0.002，p=0.032，p=0.016); p-Akt2表达量没有明显下降(p=0.133);使用p-akt1抑制剂A-674563后P53、Akt、p-Akt1表达量明显下降(p=0.004，p=0.004，p=0.011); p-Akt2表达量没有明显下降(p=0.519)。使用p-akt2抑制剂CCT128930后P53、Akt、p-Akt1、p-Akt2表达量明显下降，差异有统计学意义(p=0.014，p=0.013，p=0.010，p=0.005)。在50例食管癌组织标本中均未测出有R175H、H179R、R248Q和R273H位置的突变。 结论 食管癌较正常组织表达更多的P53、Akt、p-Akt1和p-Akt2蛋白，Akt1和Akt2蛋白可能参与了食管癌细胞的淋巴结转移。异于正常组织里P53和Akt之间的相互抑制关系，在食管癌细胞内P53蛋白和Akt1、Akt2蛋白互为促进，共同介导了肿瘤细胞的发生发展。但是蛋白之间这一相互关系的变化并不是p53基因发生突变出现p53R175H、H179R、R248Q和R273H突变体的原因，仍需进一步的研究阐明其机理。