核酸作为生命体重要的遗传物质,它的检测尤其重要,实现对核酸快速、简单、可视化的检测在生化分析领域具有重要的意义。无论是变温的核酸扩增反应,还是等温的核酸扩增反应,都是酶促反应,这类型的反应对实验条件的高要求限制了核酸检测的适用范围。所以无酶DNA自组装反应的提出,不仅在核酸检测领域,同样在DNA纳米结构和体内检测领域具有一定的应用价值。首先,本论文的第一章在无酶的指数发卡自组装反应的基础上,结合芘分子,展开指数发卡自组装反应的荧光检测,并对方法进行了验证,但方案不能满足核酸检测的要求。因此,调整实验方案,选用指数发卡自组装反应结合荧光共振能量转移对Cy3/Cy5,进行单链核酸的检测。为获得最佳的能量传递效率,对实验条件进行了优化。对方法的灵敏度进行的验证结果表明,方法的检测限为10 pM;利用添加10%胎牛血清的细胞培养基对方法的抗干扰能力进行检测,结果表明方法具有很好的抗干扰能力;另外,通过对不同错配靶标的检测,证明了该方法具有良好的特异性。其次,本课题组的研究发现,PEG 200能显著提高链置换的速率,而DNA自组装反应是DNA链之间自发的置换与杂交过程。因此我们设想PEG 200也可能促进DNA自组装反应。在论文的第三章中,选取六种常用于核酸扩增的小分子物质,将它们用于杂交链式反应反应并比较了小分子物质对杂交链式反应的影响,结果表明PEG 200为最佳的促进杂交链式反应的小分子物质,然后将PEG200用于指数发卡自组装反应,结果显示PEG 200同样能促进指数发卡自组装反应。而且,在20%的PEG 200的促进下,杂交链式反应的速率被提高100倍左右,指数发卡自组装反应的速率被提高10倍左右。最后,论文的第四章以纳米金比色为基础,从修饰后的纳米金的抗盐能力以及在加入靶标链后的变色时间及颜色变化情况比较了全修饰和不对称修饰两种纳米金修饰方式,根据实验结果确定全修饰的纳米金适合用于核酸扩增反应。然后将全修饰的纳米金用于聚合酶链式反应、环介导核酸等温扩增反应中。结果显示全修饰的纳米金对核酸扩增反应有抑制作用,通过添加BSA可减少纳米金对反应的抑制作用。但是实验的比色结果表明,该方法还不能完成明显的纳米金比色。我们认为,可以通过优化实验条件,找到集纳米金比色技术与核酸扩增反应于一体的一步核酸比色检测法。