论文部分内容阅读
大白菜(Brassica rapa L.ssp.pekinensis)原产于我国,在亚洲,特别是中国、日本和韩国是最重要的一种蔬菜作物。50年代以来,由于病毒病的普遍流行,大白菜的生产遭受了巨大的损失,病毒病成为大白菜的三大病害之一。TuMV是大白菜病毒病的主要病原物,在中国大白菜被TuMV病毒的不同株系混合侵染,其中TuMV-C4为主要株系,占分离物的45.2%,而TuMV-C5的致病性最强。目前抗TuMV病毒病已成为白菜抗病育种的主要目标,并且已经得到一些优良的抗TuMV的自交系。但在抗性转育过程中用传统的田间抗性接种鉴定法筛选抗性植株程序繁琐,费时费力,因此寻找与抗性基因紧密连锁的分子标记,进行分子标记辅助育种,将会大大提高白菜抗病育种效率。 本实验采用的抗病材料Brp058和感病材料Brp181是经过多代自交选育的自交系,其中Brp058经田间接种鉴定对TuMV病毒病表现优良的抗性。抗病材料Brp058和感病材料Brp181杂交后代构建F2分离群体,用TuMV-C5株系对F2的116个单株进行人工接种后,用田间接种鉴定和酶联检测相结合的方法对植株进行TuMV的抗性检测。采用BSA法选取极端抗病和极端感病的F2单株构建不同的三对抗感池,结合AFLP分子标记技术筛选与大白菜抗TuMV的基因相连锁的分子标记,主要结果如下: 1.经过酶联检测,在F2分离群体中其抗病单株和感病单株的比例为1:2.87,检测结果经χ2分析证明其符合1:3的分离比率,从而表明在该群体中对TuMV的抗性受单基因隐性控制。 2.利用AFLP分子标记技术,以极端抗病和极端感病的单株的预扩增产物构建三对不同的抗感池,以8个EcoRI引物,16个MseI引物组成128对引物组合,对TuMV病毒病感病基因的AFLP标记进行了筛选,结果以EcoRI-AG/MseI-CAC和EcoRI-AG/MseI-GAC两对引物组合分别筛选出两个150bp与TuMV病毒病感病基因相连锁的标记CAC150和CAG150,并且对所有116个F2单株进行鉴定,重复三次,结果稳定,其交换率分别为7.76%和6.90%,经MAPMAKER/EXP(Version3.0)作图软件统计,其遗传距离分别为8.4cM和7.5cM。 3.为了简化AFLP分子标记的操作步骤,降低试验成本,本实验将AFLP标记 CAC;扣的片段进行回收克隆,并转化到大肠杆菌 TOp中,然后回收质粒进行测序,根据序列测定结果设计了相应的SCAR引物,并对116个单株的基因组DNA进行了检测,结果表明该SCAR标记与TuMV病毒病感病基因的遗传距离为 16刀6cM。