猪瘟（Classical swine fever，CSF）是一种重要的猪的传染性疾病，给养猪业造成重大经济损失，该病的病原体为猪瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV）。近些年来已经很少见急性典型病例，主要以温和的非典型性病例为主，然而非典型病例的出现使猪瘟的防控形势更加严峻，持续性感染是猪瘟在我国难以根除的主要原因。目前对 CSF的治疗无有效方法，猪瘟还继续威胁着养殖业，因此研究并阐明 CSFV的致病机制是非常必要的。NS5B 蛋白是 RNA 依赖的 RNA 酶，保守序列为 GDD，负责RNA 复制。NS5B 蛋白具有类似于右手的手指，手掌和拇指形状的结构域，展示了聚合酶典型的一般折叠。已经证明了NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B蛋白对于基因组复制是必须的。非结构蛋白和非编码区之间的相互作用参与调控 RNA复制和翻译。然而 NS5B 蛋白也很可能通过与宿主蛋白之间的相互作用来影响 CSFV 的复制和翻译，目前NS5B蛋白与宿主蛋白之间相互作用参与病毒复制的机理并不明确。　　本研究以CSFV NS5B蛋白为诱饵，并将诱饵蛋白NS5B克隆到pGBKT7载体上，通过对诱饵蛋白自激活和毒性检测后，将转化有pGBKT7-NS5B的Y2H Gold酵母菌株与 PAM cDNA 文库进行杂交试验，最终从不同营养缺陷型培养基上筛选并得到了 90个阳性克隆，对阳性克隆进行PCR筛选鉴定，最终得到了6 0个阳性克隆，对阳性克隆进行测序。通过将测序结果与 NCBI数据库中序列信息进行Blast比对分析后，最终得到并确认 12个与 CSFV NS5B蛋白相互作用的宿主蛋白。从前期筛选的宿主蛋白中选择可能与 CSFV 复制和细胞自噬相关的甘油醛-3-磷酸脱氢酶（Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）作为进一步深入研究的宿主蛋白，酵母回返试验证实了 CSFV NS5B蛋白可以与 GAPDH蛋白相互作用。随后我们利用 GST-Pulldown和激光共聚焦均验证GADPH蛋白与NS5B蛋白存在相互作用。然而 GAPDH参与CSFV复制和细胞自噬的相关机制还有待进一步的深入研究。　　综上所述，本试验通过酵母双杂交技术筛选出了 12个与 CSFV NS5B蛋白相互作用的宿主蛋白，并且利用 GST-Pulldown和激光共聚焦验证了 GADPH 蛋白能够与NS5B蛋白相互作用。