绿球藻多糖的分离纯化、抗氧化和抑菌活性研究

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绿球藻属低等的原核生物,富含丰富的多糖、蛋白质、酚类、β-胡萝卜素等营养物质,具有抗病毒、抗肿瘤和抗血栓、抗辐射能力强,降血压、降血脂、降血糖及调节机体免疫等生物活性作用,在食品加工、医疗健康等相关领域应用前景广阔。本论文采用热水浸提法从绿球藻中提取多糖,对分离纯化后的藻多糖进行测定分析,探究其抗氧化和抑菌等功能。主要研究结果如下:(1)采用DEAE-52纤维素柱对所提取绿球藻粗多糖(CCP)进行层析分离,获得三个组分,对其命名为CPP-Ⅰ、CPP-Ⅱ和CPP-Ⅲ,采用硫酸-苯酚法测定其百分含量,结果发现其含量分别为50.80%、25.70%和5.43%;随后以主要组分CPP-Ⅰ为材料,采用Sephadex G-150凝胶层析柱对其进行纯化,得组分CPP-Ⅳ,为白色絮状物、水溶性酸性多糖。经测定绿球藻多糖CPP-Ⅳ分子量为8090.31 Da,甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖和岩藻糖摩尔比为1.68:3.26:0.09:1.00:4.56:8.11:0.28。(2)绿球藻粗多糖(CCP)及其纯化组分(CPP-Ⅳ)都具有较强的体外抗氧化能力,对多种自由基清除能力较强。结果发现,对DPPH自由基具有很好的清除能力,高浓度下与阳性对照Vc清除能力持平,且CPP-Ⅳ的IC50为0.19mg·mL-1;两者对羟基自由基的清除效果相差不大,最高浓度条件下与Vc清除率相差17.6%,CPP-Ⅳ的IC50为0.32 mg·mL-1;对超氧阴离子自由基清除过程中出现重叠现象,在浓度0.6 mg·mL-1时达到一致,CPP-Ⅳ的IC50为0.97 mg·mL-1;清除ABTS自由基能力和还原力较其他自由基而言,效果不佳。(3)除黑曲霉外,CCP和CPP-Ⅳ对变形杆菌(Proteus species)、产气杆菌(Acrobacter aerogenes)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、大肠杆菌(Escherichia coli)、黄曲霉(Aspergillus flavus)和白色念珠菌(Monilia albicans),均表现出一定的抑制作用。且对同一种菌,CPP-Ⅳ抑菌效果强于CCP。研究发现,与30 mg·mL-1浓度的CCP组相比,相同浓度的CPP-Ⅳ对细菌抑菌圈直径显著增加(p≤0.05),CPP-Ⅳ抑制作用最强的两种细菌为金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌,抑菌圈直径分别达到16.57 mm和16.41 mm,显著高于CCP的11.94 mm和10.42 mm。
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