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乙肝病毒(Hepatitis B virus, HBV)慢性感染是我国肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma, HCC)的主要病因，85%-95%的HCC是慢性乙肝（Chronic hepatitis B，CHB）感染所致。我国HCC病例占全球50%以上，HCC恶性程度高，术后易复发，生存期短。因此，寻找HBV相关HCC的危险因素，积极开展乙肝所致肝细胞癌的早期预测、预防和干预及术后辅助治疗，对降低HCC发病率和术后复发率，延长HCC患者的生存时间具有重要意义。然而，HBV变异与HCC发生的关系仍然存在争议，是HCC发生的病因还是炎癌转化过程中的伴随现象尚不清楚；核苷类似物药物是否能够阻止或延缓HBV相关HCC的发生；是否能够成为HCC患者术后辅助治疗方法以降低HCC患者术后复发率，延长HCC患者生存时间也同样未有明确的结论。因此，急需确定乙肝炎癌转化过程中不同疾病阶段的基因型特异性变异谱，并在前瞻性队列研究中验证HBV特异性变异在乙肝相关肝癌发生中的病因作用。同时明确抗病毒治疗在HBV相关肝癌发生及其预后中的作用，为降低HCC发病率，延长患者生存时间提供临床干预策略的依据。目的：探讨HBV基因组基础核心启动子（basal core promoter, BCP）区和前S（preS）区变异与CHB、肝硬化（liver cirrhosis，LC）和HCC等乙肝相关肝病进展的关系，筛选并验证个与终末期肝病密切相关的热点变异，研究抗病毒治疗在HBV相关HCC发生及预后中的效果。方法：以952例无症状表面抗原携带者（asymptomatic hepatitis B surface antigencarriers, ASCs）、327例CHB、209例LC及275例HCC为研究对象，采用病例对照方法筛选HCC相关HBV变异位点，通过包括2114名CHB患者的前瞻性队列研究验证可早期预测HCC发生的HBV变异位点。采用前瞻性队列研究明确抗病毒治疗在HBV相关的HCC发生和术后复发过程中的作用，并通过临床随机对照实验进一步验证抗病毒治疗在HBV相关HCC患者术后复发和死亡中的作用。HBV基因型采用型特异性引物多重PCR方法检测；HBV变异检测采用产物克隆测序或产物纯化后直接测序。队列随访调查采用电话调查、信访、入户调查和查询肿瘤登记等多种方式，采用统一制式调查表获得研究对象的临床参数。随机化分组方法采用区组随机化方法；使用SPSS18.0统计软件进行数据分析。结果：1、HCC相关HBV变异谱共获得1459条BCP区序列，1171条preS区序列。（1）HBV BCP区变异与CHB、LC和HCC的关系共筛选出BCP区19个位点作为本次研究的热点变异。多因素logistic回归分析发现年龄、男性、ALT升高、HBV DNA (≥104copies/ml)、基因型C、C1653T、T1674C/G、T1753V和A1762T/G1764A是乙肝患者发展为HCC的独立危险因素。 C1653T、T1674C/G和T1753V是HCC患者中特异性发生的HBV变异。用A1762T/G1764A来预测HCC的发生具有较好的敏感性和特异性。（2）HBV preS区变异与CHB、LC和HCC的关系在HBV preS区共筛选出热点变异35个，其中21个发生preS1区，14个发生在preS2区。多因素logistic回归分析发现C2964A、C3116T和C7A是HBV感染者发生HCC的独立危险因素，而A2964C和T3116C变异是HBV感染者发生LC的独立危险因素。2、HBV变异及抗病毒治疗在HCC发生中作用的前瞻性队列研究该队列共纳入2114名CHB患者，HCC发生率在抗病毒组为7.02/1000人年，对照组为13.02/1000人年，采用抗病毒治疗与对照组相比可显著降低HCC发病率（P<0.001）。多因素Cox回归分析结果表明年龄(以<40为对照，40-59岁组：HR=2.37，95%CI=1.39-4.02；≥60岁组：HR=2.51，95%CI=1.12-5.60)、男性(HR=3.96;95%CI=1.81-8.67)、肝硬化(HR=1.63;95%CI=1.03-2.59)是CHB患者发展为HCC的主要危险因素, BCP区位点变异C1653T（HR=1.63;95%CI=1.01-2.63）、T1674CG（HR=1.65;95%CI=1.05-2.59）和A1762T/G1764A（HR=2.11;95%CI=1.17-3.81）可增加CHB患者发展为HCC的风险；HBV基因型B中的A1762T/G1764A和C3116T以及C基因型中的C1653T、A1727G/T、T1753V和A3120T均是HCC发生的危险因素；而采用抗病毒治疗可显著降低HCC的发病风险(HR=0.22;95%CI=0.05-0.88)。进一步分析发现CHB患者服用核苷类似物抗病毒需60个月以上才能降低HCC的发病风险（P<0.001）；在抗病毒期间可促进HCC特异性变异发生变异至野生型转换，从而降低病毒变异导致HCC发生的风险。3、HBV相关HCC患者术后抗病毒治疗效果研究在队列研究中，抗病毒组的4年-总体生存时间（Overall Survival, OS）明显高于对照组(59.6%vs.46.6%; P=0.008)，抗病毒组的2年-无瘤生存时间（Recurrence-freeSurvival, RFS）(44.6%vs.25.5%; P<0.001)和4年RFS (37.2%vs.16.6%; P<0.001)高于对照组；HBV DNA≥104copies/mL的HCC患者术后可显著降低OS (P<0.001)和RFS（P=0.004），而核苷类似物药抗病毒治疗可显著提高术后OS（P<0.001）和RFS（P<0.001）。多因素COX回归分析结果显示年龄、肿瘤大小、肿瘤包膜、肝微小子灶，镜下血管侵犯、肿瘤分化程度、BCLC分期、肝功能和HBV DNA浓度等是HCC患者术后复发的主要危险因素，而抗病毒治疗可降低HCC患者术后复发危险（HR=0.55;95%CI=0.44-0.69)，同时可降低术后死亡风险(HR=0.57;95%CI=0.43-0.76)。在RCT研究中，实验组的2年OS、2年RFS、4年OS和4年RFS分别为93.8%、55.6%、86.4%、37.3%，对照组分别为62.2%、19.5%、47.4%和12.1%，实验组显著高于对照组（P<0.001）。在对照组中早期HCC复发率高于实验组（80.5%vs.44.4%; P<0.001）。多因素Cox分析结果表明抗病毒治疗可显著降低HCC复发(HR=0.48;95%CI=0.32-0.70)及死亡(HR=0.26;95%CI=0.15-0.50)。与对照组相比，抗病毒治疗可以显著降低早期复发(HR=0.41;95%CI=0.27-0.62),提高术后六个月肝功能（P<0.001）。术后6个月恢复肝功能的患者的2年复发率低于未恢复者（P=0.001）。在抗病毒组中，癌旁肝组织Ct-HBx阳性表达可以显著降低患者术后RFS（P<0.001）。结论：1、C1673T、A1726C、A1727T、C1730G、C1766T、T1768A、C1773T和C1799G是感染HBV基因型C的LC患者的特异性HBV变异。A1846T和T1674C/G是两个新被发现的与LC和HCC发生密切相关的变异。C2964A、C3116T和C7A是本研究新发现的可显著增加HCC发生风险的HBV变异位点，而A2964C和T3116C则是此次新发现的可显著增加LC发病风险的HBV变异。HBV preS1区的变异与HCC的发生密切相关。2、慢性乙肝患者抗病毒治疗可显著降低HCC发病率，延长生存时间；A1762T/G1764A和C3116T位点变异增加HCC发病危险；而C10A/T位点变异将降低HCC发生风险。3、HBV相关的HCC患者术后采用核苷类似物药抗病毒治疗可降低术后复发率，延长术后生存时间，癌旁组织中Ct-HBx的表达可能是抗病毒治疗预防术后复发的失败原因。