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蝴蝶兰(Phalaenopsis ssp.)素有“兰花王后”的美誉,为热带兰珍品,具有极高的观赏价值和经济价值,在世界花卉产业中占有重要的地位。现阶段蝴蝶兰的育种主要以杂交为主,但育种周期漫长,世代选择复杂。因此进行花粉管通道法介导的蝴蝶兰转基因研究,为创造特异性优异新种质开辟途径。本文较系统地开展了花粉管通道法介导转cbf 1抗寒性基因蝴蝶兰研究,主要研究结果如下:(1)对蝴蝶兰花粉活力与柱头可授性研究表明,花粉母细胞减数分裂进程与其它植物有一定差别,其生殖发育过程较为特殊,雄配子发育完成于花蕾期,开花后的蝴蝶兰花粉母细胞已进入明显的四分体时期,生殖细胞与营养核均已形成,花粉活力率(染色率)大小为:完全开放1d<花蕾期<花蕾展开期,在花蕾展开期的花粉粒活性最强,之后随时间的增加,活性逐渐降低;柱头可授性测定显示,蝴蝶兰完全开花10d~30d内柱头保持较高的活性,在10d~15d内具有较高的可授性。取花蕾展开期的花粉对完全开花10d~15d的柱头授粉,可获得较高的杂交成功率。(2)对蝴蝶兰花粉管通道介导的遗传转化受体系统进行了研究,蝴蝶兰种胚非共生萌发形成原球茎的最适培养基为Hyponex(3g/L)+琼脂7.5g/L+香蕉泥100g/L+蔗糖25g/L+蛋白胨1.5g/L+活性碳2.0g/L;原球茎增殖培养基为Hyponex(3g/L)+琼脂7.5g/L+香蕉泥100g/L+蔗糖25g/L+蛋白胨2.0g/L+NAA1.0mg/L+6-BA10.0mg/L;由原球茎实现植株再生的最适培养基为1/2MS+琼脂7.0g/L+香蕉泥100g/L+蛋白胨2.0g/L+活性碳2.0g/L+蔗糖25g/L。抗生素敏感性试验表明,蝴蝶兰原球茎及再生植株在卡那霉素选择压为0~200mg/L时,抑制生长不明显,在300~400mg/L处理组中,生长明显受到抑制,当达到500mg/L及更高浓度时,存活率为0%。可确定500mg/L的Kan为转化株阳性植株筛选的选择压力。(3)以携带目的基因cbf 1的p BI121质粒和转化了cbf 1表达载体的农杆菌液,分别采用花粉粒携带法和子房注射法进行遗传转化。结果表明,花粉携带法比子房注射法有更高的结实率,但子房注射法的转化率更高;质粒直接侵染比农杆菌转化侵染,有更高的结实率,质粒侵染的最适浓度为100ng/μL,农杆菌为OD600=1.0。对Kan筛选的阳性植株进行PCR检测,证明外源cbf 1基因已整合到Kan抗性植株的基因组中。