组织工程皮肤模型已应用于许多研究中,他们其中的主要目标之一是替代动物实验。目前大多数皮肤模型是用原代培养的细胞构建的,然而,细胞的来源有限,每代细胞之间有很大的差异,因此,皮肤模型的一致性和重复性很难保证。实验的主要目的是构建两种皮肤模型来进行皮肤刺激性测试。一种皮肤模型利用永生化上皮角质形成细胞HaCaT构建,另外一种皮肤模型利用原代培养的上皮角质形成细胞构建。我们根据欧洲替代实验确认中心规定的用于皮肤刺激性的物质中选取了20种化学品,在刺激物接触皮肤模型后,细胞活力通过MTT测得,然后收集条件培养基检测IL-1α。两种皮肤模型具有相似的结构。根据欧洲替代实验确认中心20种物质的检测结果显示两种模型都适用于进行皮肤刺激性检测,而利用永生化细胞构建的皮肤模型的敏感性和特异性均高于利用原代培养细胞构建的皮肤模型。结论:两种皮肤模型均适用于皮肤刺激性的检测,然而,在皮肤刺激性检测实验中含永生化细胞的皮肤模型具有更好的敏感性和特异性。因此,利用永生化细胞构建的皮肤模型更适合用于皮肤刺激性实验。实验分三部分:第一部分:人原代培养上皮角质形成细胞和永生化上皮角质形成细胞HaCaT增殖能力的比较为了筛选适合充当组织工程皮肤的种子细胞,比较原代培养的人原代培养上皮角质形成细胞和永生化的上皮角质形成细胞HaCaT的增殖能力。比较两种细胞的细胞周期,细胞凋亡,生长曲线。结论:永生化上皮角质形成细胞HaCaT的增殖能力要高于原代培养的上皮角质形成细胞。第二部分:利用原代培养的上皮角质形成细胞和永生化的上皮角质形成细胞构建组织工程皮肤检测模型将生长状态良好的人成纤维细胞与小牛Ⅰ型胶原混合,37°C孵育0.5h凝固后,加入培养液连续培养10d,取上述真皮基质放入24孔培养孔内,在其表面以5Х106密度接种上皮角质形成细胞培养7d,再进行气液面培养7d,即获得检测用的组织工程皮肤模型。利用相同的方法构建含永生化上皮角质形成细胞的组织工程皮肤检测模型。比较两种模型的形态学,免疫组化检测,屏障功能检测。结论:两种模型都适合用于皮肤刺激性检测。第三部分:利用构建的两种组织工程皮肤模型进行皮肤刺激性检测依据ECVAM规定的用于皮肤刺激性检测的物质中选取20种物质作用于两种皮肤模型,检测标准依据EpiSkin检测标准,检测两种皮肤模型的敏感性和特异性及IL-1α。结论:含永生化细胞的组织工程皮肤模型检测的敏感性和特异性均高于利用原代培养细胞构建的皮肤模型。