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目的: 观察补阳还五汤对实验性大鼠视神经损伤后视网膜的形态、视网膜视神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)的数量及视网膜神经节细胞膜上生长相关蛋白-43(growth associated protion43,GAP-43)表达的影响,从而探讨补阳还五汤对视神经损伤的治疗作用及其机理。 方法: 1、选取清洁级成年雌性SD大鼠40只,适应性喂养一周后,随机分成4组,其中包括正常组5只、假手术组5只、对照组15只及治疗组15只。假手术组只暴露视神经但不夹持。对照组和治疗组建立视神经钳夹伤动物模型,并根据造模后取材观察的时间点不同,分5天、14天、28天三个亚组,每个亚组5只。 2、造模成功后第二天开始,治疗组灌服补阳还五汤,同时给予对照组和假手术组灌服等量生理盐水,正常组不作处理。 3、分别在造模后5天、14天、28天取材,HE染色光镜下观察大鼠视神经损伤后视网膜形态,使用病理图像分析仪对视网膜神经节细胞进行计数,应用免疫荧光技术检测视网膜神经节细胞中GAP-43的表达。 结果: 1.视网膜形态学观察正常组:大鼠视网膜约成三层细胞核平行分布,从内到外分别为神经节细胞层、内核层、感光细胞层,其中神经节细胞层约呈单层细胞排列,而内核层和感光细胞层约呈多层细胞排列,且感光细胞层厚度约为内核层厚度的2倍。大鼠视网膜神经节细胞近似卵圆形,大小不一,节细胞间呈相对紧密排列,内界膜表面大致平滑。对照组:大鼠视网膜受损后,HE染色光镜下观察显示受损视网膜萎缩,厚度变薄,三层细胞核的数目均减少,每层细胞核之间的排列与正常组相比更为疏松紊乱。其中,内核层和感光细胞层的细胞数量虽然减少但相对不明显,视网膜神经节细胞(RGCs)的数量则呈明显降低趋势,细胞肿胀,细胞间排列较为稀疏,与正常组相比甚至有视网膜神经节细胞的缺失。治疗组:灌服补阳还五汤后,视网膜厚度仅轻度变薄,大鼠视网膜中神经节细胞层、内核层及感光细胞层的炎症反应均轻于对照组,且神经节细胞层中细胞数目多于对照组,肿胀程度亦轻。 2.视网膜神经节细胞(RGCs)计数正常组与假手术组中,前后大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)数量无显著改变,可忽略不计。在对照组中,视网膜神经节细胞(RGCs)数量明显减少,损伤两周内视网膜神经节细胞(RGCs)数目快速减少,然后速度逐渐变缓;在治疗组中,其术后5天、14天、28天的大鼠视网膜神经节细胞的数量均高于同时间点的对照组,应用SPSS19.0软件包处理实验数据,各组间比较采用t检验,显示其具有统计学差异(P<0.05)。 3.免疫荧光法检测GAP-43免疫荧光染色后,正常视网膜GAP-43表达为阴性。在对照组和治疗组3个时间点均可见GAP-43不同程度的表达,表达阳性的细胞多位于视网膜神经节细胞层,造模后5天即可看到RGCs中GAP-43表达呈阳性反映,且亮度较强,相对密集;造模后14天、28天均可看见少量GAP-43表达;在相同时间点治疗组GAP-43的表达量均较对照组表达量高。 结论: 1.致伤后,对照组视网膜神经节细胞数目减少,细胞肿胀,排列疏松紊乱;治疗组视网膜各层反应轻于对照组,说明补阳还五汤对受损后视神经炎性反应有抑制作用。 2.致伤后,在各观察点治疗组视神经中RGCs数均高于同时段的对照组,说明补阳还五汤对视网膜神经节细胞具有一定的保护作用。 3.致伤后,在相同时间点治疗组中GAP-43的表达量均高于对照组中GAP-43的表达量,说明补阳还五汤可提高GAP-43的表达,促进轴突再生、突触塑形。