论文部分内容阅读
引言：炎症性关节病包括类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis, RA)、强直性脊柱炎(Ankylosing Spondylitis, AS)和感染性关节炎。RA是一种累及周围关节为主的全身性、炎症性自身免疫病,可累及心、肺、肾、血管、血液、神经及眼等组织或器官。RA的发病机制尚未完全明确,目前认为可能是携带RA易感基因者被某种病原体感染后导致机体免疫系统紊乱,T细胞介导的免疫异常是其主要的发病机制,尤其是CD4+T细胞起着关键作用,CD4+T细胞参与了关节炎症的激发和延续。AS的临床特征是中轴关节的慢性炎症,其发病机制不明,可能是一种遗传因素(HLA-B27)占主导的多基因疾病。抗原提呈细胞表面HLA-B27分子将处理的抗原多肽提呈给免疫活性T细胞后启动了发病过程,其中T细胞免疫功能异常在其发病机制中起着重要作用。Th17细胞是近年新发现的一种辅助性T细胞,其各种特性与Thl和Th2细胞不同,产生的细胞因子包括IL-17、IL-21和IL-22等,可能在炎症性关节病(RA、AS)的致病机制中发挥重要作用。目的：检测炎症性关节病(RA、AS)外周血Th17细胞比例,及CD4+T细胞IL-17蛋白表达和IL-17、RORγtmRNA水平,并初步探讨其临床意义。方法：分离炎症性关节病(RA、AS)患者和健康人外周血单个核细胞(PBMC),免疫磁珠分选CD4~+T细胞,经PMA/Ion刺激,固定／透膜剂处理,然后进行细胞内染色,流式细胞术(FCM)检测CD4~+T细胞IL-17~+、IFN-γ~+、IL-6~+水平。应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-17、RORγtmRNA水平。应用Pearson相关性检验分析IL-17与IFN-γ、IL-6、ESR和CRP之间的相关性。分组：①健康人对照组；②病情稳定组；③病情活动组。结果：(1)免疫磁珠阴选CD4~+T细胞纯度达90%以上。(2)RA和AS病情活动组IL-17表达水平显著高于病情稳定组(P<0.01),病情活动组和病情稳定组又显著高于健康人对照组(P<0.01)。用A-CD3、A-CD28、IL-23联合刺激后,RA患者CD4~+T细胞IL-17表达水平较无刺激组显著增加(P<0.05),而AS患者无明显增加(P>0.05)。(3)RA和AS患者CD4+T细胞IL-17、RORγtmRNA水平病情活动组较稳定组和对照组显著增高(P<0.01)。用A-CD3、A-CD28、IL-23刺激后,RA和AS患者CD4~+T细胞IL-17、RORγtmRNA水平显著高于未刺激组(P<0.05),刺激12h组又高于刺激24h组(P<0.01)(4)RA和AS患者CD4~+T细胞IL-17蛋白水平与IFN-γ、IL-6无显著相关,与ESR、C反应蛋白(CRP)也未见明显相关性(P>0.05)。结论：(1)炎症性关节病(RA、AS)患者外周血CD4+T细胞中存在异常增高的Th17细胞,异常增高的Th17细胞、以及Th17/Th1/Th2三者的比例失调可能参与了RA和AS的发病过程。(2)RA和AS患者外周血CD4~+T细胞IL-17、RORγt表达水平显著增高,IL-17、RORγt异常表达可能与RA和AS的病情活动相关。