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鸡球虫病是危害养禽业的一类严重的寄生虫病，鸡球虫病的免疫预防研究越来越受到人们的重视。鸡球虫核酸疫苗以其可诱导产生较强的细胞免疫反应等优点成为当前研究的热点，并取得了一定进展。为了研究核酸疫苗对鸡球虫感染的防治效果，进行了以下试验：
1.球虫子孢子表面抗原基因(3-1E、CDPK)和鸡IFN-γ(ChIFN-γ)的亚克隆与表达：将柔嫩艾美耳球虫(Et)GS株3-1E、CDPK和ChIFN-γ基因亚克隆到pGEX-6P-1表达载体，构建重组表达质粒pGEX-I、pGEX-E和pGEX-C；分别在其宿主菌BL21进行诱导表达，得到可溶形式的GST融合蛋白；并将表达产物通过GST纯化柱进行了纯化。SDS-PAGE分析表明，表达产物均占菌体蛋白的30％以上；通过GST纯化柱，获得了90％以上纯度的GST-IFN-γ、GST-3-1E和GST-CDPK融合蛋白。
2.艾美耳球虫3-1E基因、CDPK基因和鸡IFN-γ基因的共表达：利用SOE-PCR技术将EtGS3-1E基因、EtGSCDPK基因和ChIFN-γ基因两两相连、三个相连成功构建了4个原核共表达质粒pGEX-IE、pMAL-IC、pMAL-EC、pMAL-IEC。将重组质粒pGEX-IE在BL21中表达得到GST-IE融合蛋白；将重组质粒pMAL-IC、pMAL-EC、pMAL-IEC在TB1中表达得到MBP-IC、MBP-EC和MBP-IEC融合蛋白。SDS-PAGE分析表明，表达的重组蛋白全部为包涵体形式存在，且表达量均占菌体总表达量的20％以上；包涵体处理后可得到80％以上纯度蛋白。
3.真核表达质粒的构建及体外表达检测：分别将原核重组质粒pGEX-I、pGEX-E、pGEX-C、pGEX-IE、pMAL-IC、pMAL-EC和pMAL-IEC上的单价、双价、三价基因片段亚克隆到真核表达载体proVAX中，成功构建了单价、双价和三价的真核重组质粒：proI、proE、proC、proIE、proIC、proEC和proIEC等7种。通过脂质体转染试剂盒将各真核重组质粒转染入PK-15细胞，IFAT试验结果表明，各真核重组质粒可在真核细胞中诱导表达蛋白。
4.核酸疫苗对球虫感染鸡的保护研究：鸡7日龄用核酸疫苗免疫，14日龄用相应核酸疫苗加强免疫或DNAprime-proteinboost免疫组用相应重组蛋白加强免疫，二免后7天攻击5×104个E.tenellaGS卵囊，7天后杀鸡观察免疫组的保护效果。采用淋巴细胞转化试验(MTT法)和ELISA对各试验组进行了免疫原性研究。淋转结果表明，感染后7天，各免疫组T细胞增殖反应显著，说明核酸疫苗具有较强的诱导鸡的细胞免疫反应的能力；ELISA结果表明，蛋白加强免疫组与核酸免疫组相比，诱导产生显著的血清抗体水平。攻虫感染保护效果看，与IFN-γ共表达的双价proIE和proIC的保护效果要优于单价proI、proE和proC，其中proIE组卵囊下降达到57.73％，说明鸡IFN-γ具有免疫佐剂功能，但三价proIEC的效果并不一定优于双价的效果。在蛋白加强免疫组中，用rIE和rIEC加强免疫具有很好的免疫保护效果，其余各组与单纯核酸免疫相比并没有明显的差别，其中rIEC蛋白加强组卵囊下降最高达到60.0％。DNAprime-proteinboost的策略能提高核酸疫苗的免疫原性，尤其是显著增强体液免疫反应，具体机理有待进一步研究。