论文部分内容阅读
胚胎的植入是哺乳动物受精、胚胎卵裂、致密化、囊胚形成等过程之后动物生殖过程中非常重要的一个过程。胚胎植入是活跃的囊胚和容受性子宫之间的相互作用,这种作用对胚胎着床成功至关重要。此外,这种相互作用受到卵巢激素的调节,特别是雌激素和孕激素。研究报道,多种因素在胚胎植入过程中起着重要作用,包括激素、血管活性的基因、细胞因子、生长因子、细胞粘附和发育调节因子。然而,在胚胎植入过程中涉及胚胎植入前的发育与胚胎-子宫相互作用的分子途径仍不清楚。因此,本研究旨在探讨:1)Luman/CREB3蛋白质和m RNA在小鼠胚胎植入前胚胎的时空表达,和2)小鼠怀孕子宫和胚胎内Jab1/CSN5的表达和定位。1.Luman/CREB3在附植前小鼠胚胎中的表达定位Luman/CREB3是基本亮氨酸拉链c AMP反应元件结合蛋白家族内的一种转录因子。Luman/CREB3蛋白与宿主细胞相互作用因子1和单纯疱疹病毒蛋白质VP16相互作用进而诱导单纯疱疹病毒的转录。目前,Luman/CREB3蛋白在生殖过程的生理功能尚不清楚。在此项的研究中,我们利用定量实时PCR和免疫荧光方法检测了Luman/CREB3在小鼠卵母细胞和早期胚胎发育过程中的表达与定位。研究结果证实,Luman/CREB3蛋白主要在卵泡和有丝分裂中期II阶段的卵母细胞内表达,并且主要分布在卵母细胞的细胞质,细胞核和极体上。然而,Luman/CREB3蛋白质和m RNA表达水平在合子基因组激活前有显著提高(P<0.05),并在4细胞胚胎内表达水平最高。从8细胞胚胎开始直到囊胚阶段,Luman/CREB3蛋白质和m RNA表达水平逐渐下降(P<0.05)。Luman/CREB3蛋白同样分布在早期胚胎的细胞核和细胞质内并且从2细胞胚胎到8细胞胚胎的细胞核内高度表达。Luman/CREB3在小鼠卵母细胞和早期不同发育阶段胚胎内表达与定位的差异表明Luman/CREB3在卵母细胞成熟和早期胚胎发育过程中起着重要作用。2.Jab1/CSN5在小鼠胚胎和孕期小鼠子宫中的表达定位Jun activation domain-binding protein-1(JAB1)又叫CSN5,它与COP9信号转导体的5蛋白亚基密切相关,是动植物体中保守存在的多蛋白复合体。目前,Jab1/CSN5在小鼠生殖系统发育过程中的作用仍不清楚。在目前的研究中,我们利用q RT-PCR,免疫组织化学和免疫荧光的方法检测了Jab1/CSN5在胚胎和妊娠小鼠子宫内的表达与定位。研究结果表明,Jab1/CSN5蛋白主要在子宫基质细胞内表达,然而,在子宫腺体,子宫腔上皮细胞和蜕膜细胞内没有显著表达。在怀孕5到8天的附植位点内Jab1/CSN5 m RNA的表达显著高于植入位点(P<0.05)。从第1天开始,Jab1/CSN5 m RNA整体的表达逐渐增高并且在第5天到达到最高。之后,从怀孕6到8天开始逐渐下降。在小鼠胚胎和小鼠胚胎植入前和植入后(5-12天)都没有检测到Jab1/CSN5蛋白的表达。在怀孕6到12天卵黄囊内脏内胚层内检测到了Jab1/CSN5蛋白的明显表达。总之,我们的结果证实Jab1/CSN5在基质细胞的增殖和卵黄囊的形成过程中发挥了关键作用。