p12-LOX抑制剂对胃癌细胞的作用及其机制的初步探讨

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背景胃癌是最常见的恶性肿瘤之一,我国胃癌发病率占恶性肿瘤的第二位,死亡率居恶性肿瘤首位。研究表明胃癌的发生与花生四烯酸(AA)的代谢途径有关,12-LOX是脂氧合酶家族中的成员之一,是催化AA转化为12-HETE的关键酶,12-LOX(特别是p12-LOX)及12-HETE与恶性肿瘤的关系已成为近年的研究重点。BAI是从中草药黄芩中提取的一种具有抗炎、抗氧化和抗癌活性的黄酮类化合物,是p12-LOX的选择性抑制剂,在体内和体外研究显示有较强的抑制肿瘤细胞生长和诱导凋亡的作用,目前有关BAI对胃癌细胞作用的研究报道较少。1.胃癌SGC-7901细胞中p12-LOX的表达情况目的观察p12-LOX在胃癌SGC-7901细胞中的表达情况。方法RT-PCR检测SGC-7901细胞中p12-LOX mRNA的表达及Western Blot检测SGC-7901细胞中p12-LOX蛋白的表达。结果SGC-7901细胞的RT-PCR产物经琼脂糖电泳结果,可见一条337 bp的p12-LOX基因扩增带和一条651 bp的β-actin内参基因扩增带;Western Blot结果发现,SGC-7901细胞中存在p12-LOX(75KD)蛋白的表达。结论胃癌SGC-7901细胞中存在p12-LOX mRNA及蛋白表达。2.BAI对胃癌SGC-7901细胞增殖及周期的影响目的研究BAI对胃癌SGC-7901细胞增殖及细胞周期的影响。方法分别采用MTT染色法及FCM技术检测不同浓度BAI对SGC-7901细胞增殖及周期的影响。结果随BAI终浓度(0、5、10、20、40、80μmol/L)增加和作用时间(24、48、72 h)的延长,细胞存活率明显下降;FCM分析表明:随BAI浓度的增高,G0/G1期细胞由(62.27±3.20)%降低到(29.36±1.37)%,而S期细胞的比例从(23.18±1.39)%升高到(68.21±1.64)%。结论BAI能抑制SGC-7901细胞的增殖,并呈一定的时间、浓度依赖性;BAI可改变细胞周期的分布,并呈一定的浓度依赖性。3.BAI对胃癌SGC-7901细胞VEGF表达的影响及意义目的研究BAI对胃癌SGC-7901细胞VEGF表达的影响及意义。方法RT-PCR方法检测BAI对SGC-7901细胞VEGF mRNA表达的影响,ELISA检测BAI对SGC-7901细胞中VEGF蛋白表达的影响。结果经不同浓度BAI作用6h后SGC-7901细胞的RT-PCR产物经分析表明,可见六条长度333 bp、深浅不一致的VEGF基因扩增带和六条长度371 bp、深浅基本一致的GAPDH基因扩增带。用GEL-Pro图像分析软件半定量分析条带的强弱,结果表明:BAI作用6h后VEGF mRNA表达明显低于对照组(p<0.05,除5μmol/L),而且随着BAI浓度的逐渐增加,VEGF mRNA表达量逐渐降低,提示VEGF mRNA的表达受BAI的抑制而逐渐下降。ELISA结果显示,不同浓度BAI作用SGC-7901细胞24 h后,各实验组与对照组相比,VEGF表达量明显降低(p<0.05,除5μmol/L组),提示BAI对SGC-7901细胞中VEGF蛋白表达有抑制作用,且呈浓度依赖性。结论BAI可抑制胃癌SGC-7901细胞VEGF mRNA及蛋白的表达,并呈一定的浓度依赖性;BAI抑制胃癌细胞增殖可能与下调VEGF的表达有关。
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