高危型人乳头瘤病毒(Human papillomavirus，HPV)的持续感染被认为是诱发女性宫颈癌的主要因素。宫颈癌在危害妇女健康的恶性肿瘤疾病中居第二位。世界范围内，宫颈癌每年大约有50万新发病例，死亡人数约20万;中国每年约有13万人罹患宫颈癌。与宫颈癌发生密切相关的高危型HPV有15个型别以上，其中，HPV16与18约占70％。目前，HPV疫苗被认为是防控包括宫颈癌在内的宫颈疾病的最有效手段，而现有的HPV疫苗多因成本与制造工艺困难等因素，仅能覆盖HPV16与18两个型别，无法满足需要。因此，有必要开发一种覆盖型别更广，保护率更高的HPV疫苗。扩大疫苗保护型别、L2疫苗、嵌合颗粒疫苗成为了研究多型别保护的主要方向，而广谱中和单抗及表位的研究是其中最核心的研究内容。　　本研究利用多种型别HPVL1 VLP进行了免疫，通过免疫方案及筛选检测方法的摸索，确定了一套成熟的HPV广谱中和单抗的筛选方法:使用不同型别HPVL1 VLP轮流免疫，并使用铝佐剂，免疫剂量为1-10μg/只/次，两次免疫间隔时间为三周。在免疫后26周后进行筛选，筛选时采用ELISA检测与假病毒-细胞中和实验检测相结合的实验方法。经过该方法进行免疫及筛选，得到了三株具有能够中和2种型别以上HPV假病毒的中和单抗，分别为13A10、12B9及4H4。　　本研究进一步对三株广谱中和单抗进行了系统的性质鉴定。首先，通过ELISA间接法检测发现∶13A10与A9类的HPV58/16/31/33/52 VLP均能反应，其对HPV58五聚体的结合能力较VLP低约500倍;12B9能与HPV16/31/33/58 VLP反应;4H4能与HPV16/31/33 VLP反应。其次，使用Western-bloting检测发现三株广谱中和单抗都为针对构象表位的单抗;然后，通过多型别假病毒中和实验检测广谱中和单抗的中和滴度，13A10能中和HPV16/58/31/33四种型别假病毒，其中针对HPV16与HPV58的中和滴度高达105，与型特异抗体的中和滴度相当;12B9能中和HPV33/58两型假病毒;4H4能中和HPV16/31/33三型假病毒，中和滴度在103.2至105之间;通过单抗阻断兔多抗血清、病人血清、疫苗注射者血清及型单抗多种阻断实验，其中13A10对单份的HPV58血清的阻断率都在80％以上，并且能够阻断50％以上能与HPV58反应的血清，可以确定13A10为HPV58优势中和单抗;12B9能阻断绝大多数针对HPV33的单抗，且阻断率较高;但12B9及4H4对血清阻断效果较差，因此确定这两株单抗为非优势中和抗体。最后，本研究还通过生物传感器分析了广谱中和单抗与抗原的亲和力，其中13A10与HPV58L1 VLP亲和力高到10-10mol/L，与型特异性单抗与抗原亲和力相当。　　由于13A10是一株能够中和4种HPV假病毒，具有较高的中和滴度与亲和力，而且为HPV58的优势单抗。因此，进一步对其表位进行了定位，首先，通过GFC-HPLC与AUC的实验方法，确定了13A10与HPV VLP结合的化学计量摩尔比为2.5∶1(n∶n);然后通过分子模拟的方法，对HPV58五聚体和广谱中和单抗13A10结构进行同源模建和分子对接，预测了13A10与HPV16及HPV58的结合表位:为55-59位aa、442-433位aa、177及348位aa;并通过HPV16、HPV6L1 loop互换的18种嵌合颗粒验证了分子对接的结果，确定了Ser343、Leu344、Cys345、Ala346、Ile348、Set349、Thr350中的一个或多个氨基酸为13A10的表位氨基酸。最后，确定Ile348为13A10表位氨基酸。　　综上所述，本研究进行了广谱中和单抗制备的免疫方案及筛选方法的摸索，获得三株高滴度的广谱中和单抗，通过ELISA结合、WESTERN-BLOTTING分析、假病毒中和系统检测、阻断实验、BIACORE3000亲和力分析对三株广谱中和单抗进行了系统的性质鉴定;进一步研究了广谱中和单抗的表位。本研究将有益于多价疫苗质控和广谱疫苗的分子设计等。