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在体内,哺乳动物卵母细胞的发育停滞在第一次减数分裂前期的双线期.在周期性激素的诱导下,一部分卵母细胞发生生发泡破裂,恢复减数分裂.在这一过程中,卵丘细胞中的蛋白激酶(PKC)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在卵丘包裹的卵母细胞减数分裂过程中具有重要作用,但是它们之间的相互调节及相互作用关系并不清楚.该实验主要研究了1)卵丘细胞中MAPK是否参与了PKC激活的减数分裂恢复;2)在激素诱导的减数分裂恢复过程中PKC对MAPK活性的调节作用;3)卵丘细胞中PKC和MAPK诱导减数分裂恢复的可能作用模式.体内卵母细胞减数分裂的恢复由于受到卵泡内抑制性微环境的影响而发生阻滞,激素的作用打破这一阻滞而重新启动减数分裂.该实验应用一种体外诱导模型模拟这一过程.将从卵巢中取出的猪卵母细胞培养在含有减数分裂恢复抑制剂的培养液中,然后用PKC的激活剂和激素诱导猪卵母细胞的减数分裂恢复,用蛋白质免疫印迹检测MAPK的活性.我们的结果表明PKC的激活剂,豆蔻酰佛波醇乙脂(PMA)可以诱导猪卵母细胞减数分裂恢复,同时激活卵丘和卵母细胞中的MAPK活性,而这一过程可被PKC的抑制剂chelerythrine和calphostin C所抑制.同时,MAPK上游激酶MEK的抑制剂U0126也可以抑制PMA诱导的卵母细胞减数分裂恢复和卵丘细胞中的MAPK活性,这说明PKC诱导的卵母细胞减数分裂恢复可能是通过激活卵丘细胞中MAPK的活性实现的.γ-微管蛋白是微管蛋白家族的成员之一,在微管的晶核起始过程中具有重要作用.该研究应用激光共聚焦显微术研究了小鼠卵母细胞减数分裂成熟、受精及早期胚胎发育过程中γ-微管蛋白的动态变化,以及在第一次减数分裂纺锤体形成过程中α-微管蛋白和γ-微管蛋白的共定位情况.结果表明,γ-微管蛋白均匀地分布在生发泡期(GV期)小鼠卵母细胞中;生发泡破裂(GVBD),γ-微管蛋白呈星点状分布于卵胞质及凝集的染色体周围,至前中期,则迁移至纺锤体的两极;后期至末期,γ-微管蛋白逐渐解凝集,定位于分开的染色体之间.γ-微管蛋白在第二次减数分裂及受精后的定位与第一次减数分裂过程相似.与GV期卵母细胞不同的是,在早期胚胎的间期卵裂球中,γ-微管蛋白呈星点状分布.另外,第一次减数分裂纺锤体组装过程中,在卵胞质中检测到定位几乎完全重叠的点状分布的α-微管蛋白和γ-微管蛋白,而在凝集的染色体的位置可见α-微管蛋白以γ-微管蛋白为中心向四周辐射,随着γ-微管蛋白向纺锤体两极迁移,α-微管逐渐组织形成中期纺锤体.以上结果表明,在小鼠卵母细胞减数分裂成熟、受精、及早期胚胎发育过程中,γ-微管蛋白在微管晶核起始及纺锤体形成过程中起重要作用.