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背景和目的蛇毒是蛇毒腺分泌的一种天然的蛋白质毒液，其化学成分非常复杂，是由1015种以上的物质组成的混合物，其中有515种酶、312种非酶蛋白质和多肽，以及其他各类小分子物质。目前蛇毒中研究比较广泛的蛇毒组分是心脏毒素、神经毒素、神经生长因子及抗凝和促凝血毒素等。本文研究舟山眼镜蛇（Naja naja atra）中抗肿瘤活性成分的分离纯化以及鉴定，初步研究该活性成分SVI3细胞毒效应；探讨抗肿瘤活性成分SVI3对A549细胞凋亡的作用机理。方法利用聚丙烯酸PAA吸附法除去蛇毒粗毒中的部分物质，采用离子交换UNO SphereTMS阳离子交换层析得到高纯度的蛇毒活性成分SVI3；利用SDS-PAGE对分离所得产物进行性质的鉴定；采用HPLC对蛇毒活性成分SVI3进行蛋白质纯度鉴定；MTT法测定蛇毒活性成分SVI3体外细胞毒作用；吉姆萨染色法和Hoechst33258染色法观察SVI3对A549细胞的形态影响；流式细胞仪检测蛇毒活性成分SVI3作用于A549细胞的凋亡率；JC-1法观察对A549细胞的线粒体膜电位的变化的影响；分光光度计法检测蛇毒活性成分SVI3对A549细胞Caspase-3、Caspase-9活性的影响；Western-blotting测定蛇毒活性成分SVI3作用于A549细胞后Cytochrome C，procaspase-3、-9含量的变化；S180小鼠肉瘤模型检测SVI3体内抗肿瘤活性。结果1.通过实验分离得到分析纯纯度活性成分SVI3，MTT法结果表明不同的心脏毒素CTXs对肺癌A549细胞具有不同程度的细胞毒性，同时检测蛇毒活性成分SVI3对A549细胞的毒性作用结果显示，蛇毒活性成分SVI3对A549细胞的毒性较其他的蛇毒成分更为显著，活性成分SVI3的IC50可以达到0.770μg/mL。2.吉姆萨染色法和Hoechst33258染色法结果显示在蛇毒活性成分SVI32μg/mL作用下出现明显的凋亡小体，3μg/mL作用后，细胞数量显著减少，且用药组出现细胞变圆，细胞核皱缩，染色质浓缩，形成染色质边集等现象。流式细胞仪检测技术检测随着蛇毒活性成分SVI3浓度的增加，细胞凋亡率显著增加。3. JC-1法结果显示蛇毒活性成分SVI3可以诱导A549细胞膜线粒体膜电位下降。活性成分SVI3诱导A549细胞后Caspase-3、Caspase-9活性升高，Western blotting结果显示活性成分SVI3（5μg/mL）在诱导A549细胞0.5h后，胞浆中检测到Cytochrome C；cleave caspase-3出现时，procaspase-9的含量没有显著变化，结果显示诱导细胞凋亡具有实效关系；体内抑肿瘤显示在剂量为0.5mg/kg/d和1.0mg/kg/d时，抑制率分别为59.99%和85.45%。结论1.建立了从舟山眼镜蛇蛇毒中分离纯化出一种具有抗肿瘤作用的活性成分SVI3，且活性成分纯度可以达到99%。2.经过体外实验和体内实验结果显示，蛇毒活性成分SVI3具有非常显著的抗肿瘤活性。3.活性成分SVI3对A549细胞凋亡作用不仅仅是通过线粒体途径，还有可能通过其他途径影响caspase家族参与凋亡作用。