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众所周知,细胞周期紊乱与人类癌症和异常细胞周期相关,细胞周期紊乱可由细胞周期蛋白依赖激酶（CDKs）的错误调节直接或间接介导。在“经典”细胞周期模型中,细胞周期蛋白E（Cyclin E）和细胞周期蛋白依赖激酶2（CDK2）通过磷酸化视网膜母细胞瘤蛋白（RB）调节G1-S转换,使E2F调节的靶基因进行正常表达和细胞增殖。CDK2/4/6抑制剂降低细胞周期蛋白/CDK复合物的激酶活性并阻断从G1期到S期的转变。CDK4/6抑制剂如瑞博西尼（Ribociclib）、阿贝西尼（Abemaciclib）和帕博西尼（Palbociclib）已被批准用于癌症的临床治疗。CDK2可能是逆转对CDK4/6抑制剂耐药的ER+乳腺癌的潜在靶点。许多CDK2抑制剂如PF-07104091和CYC065正处于临床前试验中。除了竞争性抑制剂外,还开发了靶向CDK2 的蛋白水解靶向嵌合体（proteolysis-targetingchimeras;PROTACs）,它促进了不同细胞系中CDK2的快速有效降解,而不降解其他蛋白,可作为提高CDK2抑制效果的替代技术。近年来,越来越多的研究报道了关于CDK蛋白家族在细胞周期以外的其他生物过程中的作用。例如,选择性CDK4/6抑制剂不仅可以诱导肿瘤细胞周期停滞,还可以通过增加Ⅲ型干扰素来促进抗肿瘤免疫反应:细胞周期蛋白D-CDK4激酶通过Cul3SPOP调控程序性死亡配体1（PD-L1）以控制癌症免疫监视;有丝分裂中的CDK1通过磷酸化ULK1-ATG13将自噬与细胞周期联系起来。尽管许多研究都将CDK2抑制剂的作用机制集中在使细胞周期停滞、诱导细胞凋亡或诱导细胞分化来抑制肿瘤,但关于CDK2是否具有其他参与抗肿瘤免疫的功能知之甚少。大约10%的哺乳动物基因组序列对应于内源性病毒元件（EVE）,包括内源性逆转录病毒（ERV）,内源性逆转录病毒被认为源自古病毒感染生殖细胞后整合到基因组中保留下来的序列。ERVs的转录本存在于大多数组织中,这些转录本可以通过双向转录产生双链RNA（dsRNA）,类似于外源性病原体相关分子模式（PAMPs）,可被模式识别受体（PRR）所识别,从而激活先天免疫反应,包括产生促炎性细胞因子、趋化因子和Ⅰ型干扰素（IFN-Ⅰ）。这些内源性病毒元件衍生的免疫反应可能在维持宿主细胞的基础抗病毒状态中起重要作用。DNA甲基化是将甲基共价添加到DNA核苷酸上。在大多数动物研究中,DNA的甲基化过程只发生在胞嘧啶中,尤其是CpG二核苷酸位点,由DNA甲基转移酶（DNMT）进行甲基化。DNMT3A、3B和3L是DNMT3家族成员之一。DNMT3A和DNMT3B被认为在发育过程中进行DNA的所有从头甲基化。该家族的另一个成员DNMT3L没有催化活性,但会刺激其他DNMT3酶的活性。相比之下,DNMT1被认为是DNA复制后维持DNA甲基化的主要酶。Dnmt1的适当调节对于维持印迹基因的DNA甲基化是必要的。胞嘧啶甲基化在调节基因表达中起关键作用,包括转座因子（TE）如ERVs的表达。ERVs通常在所有细胞中完全甲基化。尽管有些人认为ERVs表达是表观遗传重编辑的简单衍生物,但其他研究表明ERVs可能有助于多能性。DNMT1抑制剂5-氮杂胞苷（5-Azacytidine）和5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-aza-2’-deoxycytidine）可增加多种DNA高甲基化ERVs的表达,诱导干扰素反应,调节PD-L1。在体内实验中,我们发现与MCA205肿瘤相比较,敲除CDK2的肿瘤在免疫功能正常的C57BL/6N小鼠中肿瘤生长缓慢,但在免疫功能缺陷的裸鼠中二者的肿瘤生长曲线无统计学差异;通过流式分析及免疫荧光实验,我们发现,与WT肿瘤微环境相比较,CDK2缺失的肿瘤微环境中浸润的CD8+T细胞等免疫细胞增多,差异具有统计学差异。从机制上讲,我们发现,在细胞水平上,通过二代测序、荧光定量PCR和ELISA实验证明肿瘤细胞敲除CDK2后IFNβ分泌增多,ISG的表达上调,Ⅰ型干扰素信号通路被激活。并且CDK2敲除的肿瘤使用IFNAR阻断抗体与不使用阻断抗体的生长曲线差异有统计学意义,在Ifnar-/-的C57BL/6小鼠上生长的CDK2敲除的肿瘤与在野生型C57BL/6小鼠上生长的肿瘤更大,差异具有统计学意义。通过对内源性逆转录病毒MMERVK10C的3’LTR进行重亚硫酸盐测序我们发现肿瘤细胞敲除CDK2后MMERVK10C的甲基化水平降低。通过荧光定量PCR及免疫荧光实验我们发现肿瘤细胞敲除CDK2后MMERVK10C表达量增多,dsRNA形成增多。我们在蛋白免疫印迹实验和荧光定量PCR实验中发现肿瘤细胞敲除CDK2后DNMT1的表达下降及P-RB（S807）的磷酸化水平降低,并且在敲除细胞中过表达DNMT1构建稳定表达的细胞系以及构建的CDK2及RB双敲细胞系进行荧光定量PCR及体内实验后,与CDK2敲除细胞相比,ISG表达降低,肿瘤生长更快,差异具有统计学意义。并且我们使用CDK2的PROTAC小分子降解剂CPS2进行体内实验,我们也发现CPS2瘤内注射后的肿瘤生长曲线缓慢,与DMSO组差异具有统计学意义;流式分析发现CPS2给药后免疫细胞浸润增多;我们在蛋白免疫印迹实验和荧光定量PCR实验中发现CPS2处理MCA205细胞后DNMT1的表达下降及P-RB（S807）的磷酸化水平降低,dsRNA形成增多。并且在多种人肿瘤细胞系上CPS2给药后也发现DNMT1表达下降,MMERVK10C及ISG表达上调。细胞周期蛋白依赖激酶2的抑制剂已用于多种实体瘤的临床前研究,其主要作用机制被认为是阻滞细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡或诱导分化。在我们的研究中,我们发现CDK2敲除的肿瘤细胞或CDK2的小分子抑制剂促进了纤维肉瘤和肺癌小鼠模型的抗肿瘤免疫活性。从机制上讲,抑制CDK2降低了成视网膜细胞瘤蛋白（RB）的磷酸化和E2F介导的DNA甲基转移酶1（DNMT1）的转录,从而诱导内源性逆转录病毒（ERV）RNA的表达和Ⅰ型干扰素（IFN-Ⅰ）反应。增加的Ⅰ型干扰素反应随后促进肿瘤抗原递呈和CD8+T细胞浸润来增强抗肿瘤免疫。我们的研究表明,肿瘤细胞抑制CDK2后能增强肿瘤微环境中的抗肿瘤免疫应答以抑制肿瘤生长,为CDK2抑制剂增强抗肿瘤免疫反应提供一种新机制。