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食品安全问题是当今全世界关注的焦点问题之一,导致食品安全问题的因素众多,其中食源性致病菌是导致食品安全的主要原因之一。因此,对食源性致病菌进行快速、准确定量检测对于预防和控制由食源性致病菌导致的食品安全问题具有重大意义。荧光定量聚合酶链式反应(fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qPCR)因其具有快速、高通量等优点被广泛用于食源性致病菌的定量检测,但是,该方法不能区分检测对象是活菌还是死菌。叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)是一种对DNA具有高度亲和力的核酸染料,能有效排除死菌对活菌的干扰。本研究结合PMA和qPCR,建立了食品中常见的几种食源性致病菌(产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157:H7、克罗诺杆菌和沙门氏菌)的快速定量检测方法,以期为食源性致病菌的快速准确筛查提供技术支持。论文具体内容分述如下:第一章介绍了由食源性致病菌导致的食品安全问题的现状,并综述了活菌检测相关技术以及PMA在活菌检测中的应用。第二章建立了基于染料法的PMA-qPCR方法,并将其应用于牛奶中产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌的快速定量检测。结果表明:当产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌活菌的浓度为10~2-10~6 CFU/mL时,其Ct值与活菌浓度呈较好的线性相关性;基于最佳反应条件,产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌在纯菌液和牛奶加标样中的检测限均为10~2 CFU/mL。第三章建立了基于探针法的PMA-qPCR方法,并分别将其用于快速定量检测牛奶中的大肠杆菌O157:H7和金黄色葡萄球菌。结果表明:当大肠杆菌O157:H7和金黄色葡萄球菌的浓度为10~2-10~6 CFU/mL时,其Ct值与活菌浓度呈较好的线性相关性;在最优实验条件下,大肠杆菌O157:H7和金黄色葡萄球菌在纯菌液和牛奶加标样中的检测限均为10~2 CFU/mL。第四章建立了基于SD-PMA-mqPCR的活菌检测方法,并将其应用于牛奶中的大肠杆菌O157:H7、克罗诺杆菌和沙门氏菌的同时定量检测。分别应用脱氧胆酸钠(Sodium deoxycholate,SD)和PMA处理样品,排除死菌(膜完整死菌和膜损伤死菌)对活菌的干扰,结合mqPCR技术,建立基于SD-PMA-mqPCR的活菌检测方法,并将其应用于同时定量检测牛奶中的上述三种菌。结果表明:当三种菌的浓度为10~2-10~7 CFU/mL时,其Ct值与活菌浓度呈较好的线性相关性;基于最佳反应条件,三种菌在纯菌液和牛奶加标样中的检测限均为10~2 CFU/mL。