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第一部分:薏苡仁酯对同源不同辐射抗性鼻咽癌细胞生物学行为的影响目的:探讨薏苡仁酯(coixenolide,CXL)对同源不同辐射抗性鼻咽癌细胞增殖、凋亡及迁移的等生物学行为的影响,为下一步研究CXL以何种机制作用于鼻咽癌细胞提供理论及实验依据。方法:采用 CCK-8 法检测不同浓度 CXL(0、0.5、1、5、10、20g/L)分别作用于CNE-2R和CNE-2细胞24 h,48 h,72 h后细胞活性的改变;通过DAPI染色法检测不同浓度CXL(0、1、5、10g/L)分别作用于CNE-2R和CNE-2细胞72h后细胞凋亡的形态学改变,通过流式细胞术检测不同浓度CXL(0、1、5、10g/L)作用72h后对CNE-2R和CNE-2细胞凋亡水平的影响;通过Transwell实验检测不同浓度CXL(0、1、5、10 g/L)作用72h后对CNE-2R和CNE-2细胞迁移能力的影响。结果:CCK-8法显示CXL呈剂量-时间依赖性的抑制CNE-2R(24 h,48 h,72h 的 IC50 分别为 273.20 g/L,10.88 g/L和 4.55 g/L)和 CNE-2(24 h,48 h,72 h 的 IC50 分别为 256.60 g/L,5.44 g/L 和 2.43 g/L)的细胞活性;DAPI染色显示CXL组细胞中可见染色质边集、浓缩并分割为块状;与对照组相比,流式细胞术显示CXL作用于CNE-2R[(4.51±0.09)vs(11.68±3.54),p<0.05]和 CNE-2[(5.27 ± 0.14)vs(15.68 ± 2.76),p<0.05]细胞凋亡率均明显增加;Transwell实验显示CXL呈剂量依赖性显著抑制了 CNE-2R和CNE-2细胞的迁移能力。结论:该研究表明CXL可抑制同源不同辐射抗性鼻咽癌细胞CNE-2R和CNE-2增殖和迁移的能力,同时能够诱导其凋亡,以上作用效应均呈剂量依赖性改变。第二部分:薏苡仁酯作用于同源不同辐射抗性鼻咽癌细胞对线粒体通路蛋白表达的影响目的:探讨CXL诱导同源不同辐射抗性鼻咽癌细胞凋亡的作用机制与线粒体通路凋亡蛋白表达的关系。为CXL抗鼻咽癌作用提供了理论及实验依据。方法:验证CXL分别作用于CNE-2R和CNE-2细胞0,24 h,48 h,72 h后,通过Western blot法检测细胞内相关凋亡基因Bax、Bcl-2、Caspase-9、cleaved-caspase-3、cleaved-PARP 的蛋白表达水平以及 Bcl-2/Bax 比值。结果:Western blot 法显示,CXL 组 Bax、Caspase-9、cleaved-caspase-3、cleaved-PARP蛋白表达量较对照组均显著增加(p<0.05),Bcl-2蛋白表达量显著降低(p<0.05),Bcl-2/Bax比值降低(p<0.001);结论:CXL可能通过线粒体途径介导同源不同辐射抗性鼻咽癌细胞的凋亡。第三部分:薏苡仁酯对同源不同辐射抗性鼻咽癌细胞的放疗增敏作用目的:探讨CXL对同源不同辐射抗性鼻咽癌细胞放疗增敏的影响,为进一步逆转鼻咽癌辐射抗性、寻找潜在放疗增敏剂提供了理论及实验依据。方法:浓度为0.1 g/L CXL分别作用于CNE-2R和CNE-2细胞24 h后,分别接受剂量为0、2、4、8Gy的X线照射剂量,通过克隆形成实验计算SF、采用Graphpad软件拟合单击多靶存活模型并绘制存活曲线,求出其特征性参数n、Do和Dq等,并通过所得参数计算出CXL分别作用于CNE-2R和CNE-2细胞的放射增敏比SER,分析CXL对同源不同辐射抗性鼻咽癌细胞放疗增敏的影响。结果:克隆形成实验显示,0.1 g/L CXL作用于CNE-2R和CNE-2细胞24h后,经过0、2、4、8Gy的X射线照射,实验组细胞的SF均较空白组低,建立单击多靶模型并绘制存活曲线显示,经过0、2、4、8Gy的X射线照射后CXL处理的实验组存活曲线较空白组的存活曲线降低,求出CNE-2R以及CNE-2细胞的特征性参数n、Do和Dq,通过所得参数计算出CXL作用于CNE-2R和CNE-2细胞的放射增敏比SER分别为1.55,1.37,提示CXL对CNE-2R和CNE-2细胞有显著的放射增敏作用。结论:CXL对同源不同辐射抗性鼻咽癌细胞具有放疗增敏的作用。