论文部分内容阅读
[背景]:Livin是最新的凋亡抑制蛋白家族成员之一,大量研究表明Livn可以在多种肿瘤(包括肺癌)中高表达并促进肿瘤发生发展,有望成为潜在的肿瘤靶点之一。Livin的在肺癌中的高表达可能与其抗凋亡相关,但其具体机制和环节有待于进一步研究。[目的]:本研究目的在于探索:(1)Livin在肺癌、肺良性组织中的表达及其与肺癌临床病理特征之间的相关性;(2)Livin表达与各个相关凋亡抑制途径中关键因子(Bcl-2、Pro-caspase-3、Cleaved-caspase-3、非磷酸化JNK1、磷酸化JNK1)表达的相关性;(3)探讨Livin对肺癌预后分析的关系。[方法]:用免疫组织化学方法(二步法以及SABC法)对标本进行Livin蛋白、Bcl-2蛋白、Pro-caspase-3蛋白、Cleaved-caspase-3蛋白、非磷酸化JNK1蛋白以及磷酸化JNK1蛋白的检测。另外用原位杂交方法对标本进行LivinmRNA、Caspase-3mRNA的检测。两样本率比较采用χ2检验和Fisher确切概率法,对二者之间的相互关系采用Spearman等级相关分析,以α=0.05为检验标准。对预后采用COX比例风险模型和Kaplan-Meier生存分析。[结果]:1.Livin蛋白、Bcl-2蛋白、Pro-caspase-3蛋白、Cleaved-caspase-3蛋白、非磷酸化JNK1蛋白定位于胞浆,未见核表达。磷酸化JNK1蛋白大多数定位于胞浆,偶见核表达。2.肺癌组织中Livin蛋白阳性表达率为65.78%,但在肺良性病变组织中未见阳性表达,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。Bcl-2蛋白阳性表达率为70.05%,但在肺良性病变组织中未见阳性表达,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。肺癌组织中Pro-caspase-3蛋白阳性表达率为64.17%,在肺良性病变组织中阳性表达率为87.5%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。肺癌组织中Cleaved-caspase-3蛋白阳性表达率58.83%,而在肺良性病变组织中阳性表达率为82.5%,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。肺癌组织中非磷酸化JNK1蛋白阳性表达率为46.5%,而在肺良性病变组织中阳性表达率为70%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。肺癌组织中磷酸化JNK1蛋白阳性表达率为58.29%,而在肺良性病变组织中阳性表达率为40.00%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。3. Livin蛋白在鳞癌、腺癌以及其他癌类的阳性表达率分别为74.07%、61.96%、42.86%,三组比较差异有统计学意义(P<0.05)。Bcl-2蛋白在在鳞癌、腺癌以及其他癌类的阳性表达率分别为77.78%、67.39%、42.86%,三组比较差异有统计学意义(P<0.05)。Pro-caspase-3蛋白在在鳞癌、腺癌以及其他癌类的阳性表达率分别为51.82%、76.09%、57.14%,三组比较差异有统计学意义(P<0.05)。磷酸化JNK1在鳞癌、腺癌以及其他癌类中的表达率分别为61.73%、52.17%、78.57%,三组比较差异有统计学意义(P<0.05)。4. Livin与Bcl-2表达有紧密的正相关(r=0.414,p=0.000)。Livin与Pro-caspase-3表达虽然具有负相关的趋势,但没有统计学意义(r=-0.116,p=0.114)。Livin与Cleaved-caspase-3具有显著的负相关(r=-0.168,p=0.021)。Pro-caspase-3与Cleaved-caspase-3的表达存在着正相关性(rs=0.191,P=0.009)Livin蛋白与非磷酸化JNK1蛋白的表达虽然有一定的负相关性,但无显著的统计学意义(rs=-0.050,P=0.494)。非磷酸化JNK1蛋白与磷酸化JNK1蛋白呈现显著的负相关性(rs=-0.146,P=0.046)。5.淋巴结转移是影响肺癌手术病人预后的独立因素。而年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤部位、Livin表达、Bcl-2表达、Pro-caspase-3表达、Cleaved-caspase-3表达、非磷酸化JNK1表达以及磷酸化JNK1表达与肺癌手术患者预后未见明显相关性。6.LivinmRNA、Caspase-3mRNA定位于胞浆,未见核表达。LivinmRNA、Caspase-3mRNA在肺癌中的表达与患者的年龄、性别、细胞分化程度、淋巴结转移、TNM分期、肿瘤大小以及部位无明显相关。7.肺癌组织中LivinmRNA阳性表达率为50.00%,但在肺良性病变组织中未见阳性表达,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。肺癌组织中Caspase-3mRNA阳性表达率为42.42%,但在肺良性病变组织表达率为68.18%,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。LivinmRNA与Caspase-3mRNA也呈现显著的负相关(r=-0.368,P=0.002)。8.LivinmRNA表达阳性组生存率为30.30%,LivinmRNA表达阴性组患者生存率为69.70%,两者差异有统计学意义(P=0.004),而Livin蛋白表达阳性组生存率为41.5%,Livin蛋白表达阴性组生存率为64.0%,两者差异无明显统计学意义(P=0.121),但在术后1至5年的生存率有明显差异。[结论]:1.肺癌组织中LivinmRNA以及Livin蛋白阳性表达率明显高于肺良性病变组织,同时结合Livin以及其他IAP家族成员的体外实验结果,提示Livin可能通过抑制细胞凋亡而对肺癌的发生发展起重要的作用,故有望成为肺癌诊断的肿瘤标志物和肺癌治疗的新途径。2. Pro-caspase-3和Cleaved-caspase-3在肺癌与肺良性组织中的表达差异表明无论是Pro-caspase-3还是Cleaved-caspase-3的失表达与肺癌的发生相关,提示两者可能在肺癌细胞的恶性转化及肺癌的发生发展中起重要的作用。3.非磷酸化JNK1在肺良性组织中的表达高于肺癌组织,提示了存在着非磷酸化JNK1下调的现象,但磷酸化JNK1在肺癌的表达却显著高于肺良性组织,这提示了不同状态的JNK1在肺癌癌变过程中也许发挥着截然相反的机制。4.在肺癌的发生发展过程中,Livin主要在下游水平直接抑制caspase-3(包括前体和剪切体),Bcl-2主要在上游水平间接抑制caspase-3(包括前体和剪切体)。Livin与Bcl-2各自的凋亡途径可能通过caspase-3(包括前体和剪切体)会聚起来,协同转化为强大的抗凋亡作用。Livin主要抑制除Pro-caspase-3以外的前体半胱氨酸蛋白酶,而主要抑制Cleaved-caspase-3。Cleaved-caspase-3的激活依赖于原体,Livin抑制Pro-caspase-3和Cleaved-caspase-3的过程一般共存于细胞中,但以后者为主。5.非磷酸化JNK1蛋白定位于胞浆。而磷酸化JNK1蛋白大多数定位于胞浆,偶尔出现核表达,在受到激活信号后迅速而显著的聚集于核中,并导致相应基因的表达改变。磷酸化JNK1的核表达可能会成为判断肺癌预后的一个重要指标,核表达提示预后较佳。同时这为JNKs通路参与肺癌的形成和发展提供了间接的证据。6.LivinmRNA表达与肺癌患者预后密切相关,Livin蛋白可能与肺癌患者预后相关。